大家好！ 祈求大家可以集思廣益幫助幫助我！ 給我一點意見或是可以參考的文獻和方向！ 麻煩大家了！ ——————— 研究background————- 原本的研究方向：研究某藥物的抗藥性機制 在實驗設計中是使用小鼠model進行此實驗，並用口服的方式去給藥。 設計了不同劑量和給藥頻率的組別後開始進行此實驗，將腫瘤細胞打在小鼠皮下，等腫瘤 大小長到約200mm3後開始給藥 過程： 實驗中發現有某一組給藥頻率和劑量的小鼠符合自己設計的預期，一開始給藥時，藥物 非常有效，在給了兩週後腫瘤消到約100mm3上下，因此停藥，停藥3週後觀察到腫瘤開始 慢慢長回來了，約第6週時復發的腫瘤長到約500mm3，因此重新繼續執行之前的給藥計畫 ，一開始藥物也都還有效果，腫瘤的生長受到抑制並且慢慢消下去，約消到300mm3後腫瘤 的生長抑制開始趨於平緩，持續約3-4週（此時都還有持續給藥） 後來，約第16週時，藥物開始失去效果，腫瘤開始變大，因此先增加了單次給藥劑量， 觀察沒有效果後，也增加了給藥頻率，也發現沒有效果後，成功在動物身上建立了這種腫 瘤生長曲線看起來像復發後產生抗藥性的動物模型，取下tumor後做了primary culture ，在in vitro繼續培養，做後續研究 原本一切都很順利，直到最近送了RNAseq，發現從primary culture 中挑的single-clo ne（約8株morphology 和抗藥性都不同的clone)沒辦法align 上human genome （mapping rate<10%) 因此轉去mapping mouse genome 發現mapping rate>90% 因此現在很苦惱，前面一年多的實驗似乎都白做了的感覺 想請問大家有沒有遇過看過或聽過這種事情或有文獻在探討這種事情，或是有沒有什麼 建議可以給我參考，後續該如何繼續做下去 目前可能會先回頭去確認primary culture 出來的cell line是否都是小鼠細胞或其中 有參雜human cancer cell 回顧一下自己的實驗過程，覺得有小鼠細胞的機率應該很低，primary culture出來後也 有養超過40代過，細胞也都還會長（如果是正常細胞應該早就衰老死亡？，挑完single到 後續放大到足夠數量應該也很接近40代）；整個過程似乎也不像那種自發性產生的小鼠腫 瘤（或有人遇過這種事情嗎？ 細胞也都確實有抗藥性（IC50是parental的15-20倍），摸不著頭緒到底是哪裡出了問 題 麻煩各位幫忙集思廣益，我好像真的束手無策了，有經驗的前輩們麻煩你們分享一下自 己的經驗或想法，分享自己的所見所聞 努力了快兩年結果就這樣好像準備要休學真的有點不甘心，麻煩各位了！！ 感謝大家！ --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 49.217.123.128 (臺灣) ※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1719428700.A.006.html 當初打的就是human cell line，沒有做任何處理，所以沒辦法確認，也沒有marker 沒錯，打H446 cell line在皮下，給藥誘導抗性後（tumor長起來以後）才切出來做prima ry culture ;現在唯一比較合理的解釋是產生cell fusion（？ 但正在嘗試看看有沒有辦 法驗證這件事情 ※ 編輯: AFimtu27 (49.217.123.128 臺灣), 06/28/2024 23:14:47