作者AFimtu27 (Atian)
看板Biotech
标题[求救] mouse-CDX 中培养出小鼠细胞的经验
时间Thu Jun 27 03:04:58 2024
大家好! 祈求大家可以集思广益帮助帮助我!
给我一点意见或是可以参考的文献和方向!
麻烦大家了!
——————— 研究background————-
原本的研究方向:研究某药物的抗药性机制
在实验设计中是使用小鼠model进行此实验,并用口服的方式去给药。
设计了不同剂量和给药频率的组别後开始进行此实验,将肿瘤细胞打在小鼠皮下,等肿瘤
大小长到约200mm3後开始给药
过程:
实验中发现有某一组给药频率和剂量的小鼠符合自己设计的预期,一开始给药时,药物
非常有效,在给了两周後肿瘤消到约100mm3上下,因此停药,停药3周後观察到肿瘤开始
慢慢长回来了,约第6周时复发的肿瘤长到约500mm3,因此重新继续执行之前的给药计画
,一开始药物也都还有效果,肿瘤的生长受到抑制并且慢慢消下去,约消到300mm3後肿瘤
的生长抑制开始趋於平缓,持续约3-4周(此时都还有持续给药)
後来,约第16周时,药物开始失去效果,肿瘤开始变大,因此先增加了单次给药剂量,
观察没有效果後,也增加了给药频率,也发现没有效果後,成功在动物身上建立了这种肿
瘤生长曲线看起来像复发後产生抗药性的动物模型,取下tumor後做了primary culture
,在in vitro继续培养,做後续研究
原本一切都很顺利,直到最近送了RNAseq,发现从primary culture 中挑的single-clo
ne(约8株morphology 和抗药性都不同的clone)没办法align 上human genome (mapping
rate<10%)
因此转去mapping mouse genome 发现mapping rate>90%
因此现在很苦恼,前面一年多的实验似乎都白做了的感觉
想请问大家有没有遇过看过或听过这种事情或有文献在探讨这种事情,或是有没有什麽
建议可以给我参考,後续该如何继续做下去
目前可能会先回头去确认primary culture 出来的cell line是否都是小鼠细胞或其中
有参杂human cancer cell
回顾一下自己的实验过程,觉得有小鼠细胞的机率应该很低,primary culture出来後也
有养超过40代过,细胞也都还会长(如果是正常细胞应该早就衰老死亡?,挑完single到
後续放大到足够数量应该也很接近40代);整个过程似乎也不像那种自发性产生的小鼠肿
瘤(或有人遇过这种事情吗?
细胞也都确实有抗药性(IC50是parental的15-20倍),摸不着头绪到底是哪里出了问
题
麻烦各位帮忙集思广益,我好像真的束手无策了,有经验的前辈们麻烦你们分享一下自
己的经验或想法,分享自己的所见所闻
努力了快两年结果就这样好像准备要休学真的有点不甘心,麻烦各位了!!
感谢大家!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 49.217.123.128 (台湾)
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1F:→ milkpa: 当初有没有放marker?确认长出来的是你放进去的06/27 21:15
当初打的就是human cell line,没有做任何处理,所以没办法确认,也没有marker
2F:推 tharaohfu: 再厘清一下 所以你是将human tumor cell打到 06/28 22:55
3F:→ tharaohfu: immunodeficient mice上,再做primary culture?06/28 22:56
没错,打H446 cell line在皮下,给药诱导抗性後(tumor长起来以後)才切出来做prima
ry culture ;现在唯一比较合理的解释是产生cell fusion(? 但正在尝试看看有没有办
法验证这件事情
※ 编辑: AFimtu27 (49.217.123.128 台湾), 06/28/2024 23:14:47
4F:推 tharaohfu: 先确认挑出来的clone是否为你要的tumor cell 06/28 23:41
5F:→ tharaohfu: 找个anti-human epithelial marker跑个flow马上就知道 06/28 23:42
6F:→ tharaohfu: 当然要先查一下paper H446会表现什麽marker 06/28 23:45
7F:→ tharaohfu: 同步再确认mapping data有没有什麽设定有错误 06/28 23:47
8F:推 tharaohfu: 总之gene出问题就从protein同步再验证 06/29 00:02