作者belzy (zy)
看板Biotech
標題[求救] stable transfect的螢光表現
時間Wed Jan 3 15:33:16 2024
Transfect新手研究生
要做overexpressed stable cell line，Insert 後面接紅色螢光當標記（有IRES也有直接
做fusion的組別)
之前有先測試g418的濃度（800ug/ml)
現在遇到的問題是，在篩選之後有一些不會表達螢光的細胞長得很好，跟有螢光的混在一起
分不開，是因為我一開始篩選的時候細胞不夠散嗎？
分盤之後再篩，沒有螢光的依然長得很好，已經會長得很均勻而不是團塊的樣子，還是沒辦
法只把有螢光的細胞分出來
想請問那些沒有螢光卻活下來的細胞，是螢光的promoter沒有被推動但是g418的promoter有
，還是篩出了有抗藥性的細胞？？還是其他原因？
還想請問我現在這個狀況有什麼補救的方法嗎？
感謝各位前輩們
在stable cell line卡好久卡到想休學了…orz
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1F：推 ysfang623: 先抓瞬轉的條件，看多少DNA可以表現最多的螢光，抗生 01/03 17:59
2F：→ ysfang623: 素晚一點再下 01/03 17:59
3F：→ xxtomnyxx: 你的「篩」指的單純用藥殺還是有挑從1顆細胞長出的細胞 01/03 21:22
4F：→ xxtomnyxx: 群把它分離出來單獨培養？ 01/03 21:22
5F：→ xxtomnyxx: 你用的 vector 是什麼？ pEF1 嗎？用 dual-promoter去 01/03 21:23
6F：→ xxtomnyxx: 分別表現 GOI 和抗藥基因的vector的確會有GOI的promote 01/03 21:24
7F：→ xxtomnyxx: r被關掉了但抗藥基因的promoter仍持續表現的問題 01/03 21:24
8F：推 showwhale: 我們以前也遇過這種事 當時解決方法就是sorting 03/01 11:35