作者belzy (zy)
看板Biotech
标题[求救] stable transfect的萤光表现
时间Wed Jan 3 15:33:16 2024
Transfect新手研究生
要做overexpressed stable cell line，Insert 後面接红色萤光当标记（有IRES也有直接
做fusion的组别)
之前有先测试g418的浓度（800ug/ml)
现在遇到的问题是，在筛选之後有一些不会表达萤光的细胞长得很好，跟有萤光的混在一起
分不开，是因为我一开始筛选的时候细胞不够散吗？
分盘之後再筛，没有萤光的依然长得很好，已经会长得很均匀而不是团块的样子，还是没办
法只把有萤光的细胞分出来
想请问那些没有萤光却活下来的细胞，是萤光的promoter没有被推动但是g418的promoter有
，还是筛出了有抗药性的细胞？？还是其他原因？
还想请问我现在这个状况有什麽补救的方法吗？
感谢各位前辈们
在stable cell line卡好久卡到想休学了…orz
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1F：推 ysfang623: 先抓瞬转的条件，看多少DNA可以表现最多的萤光，抗生 01/03 17:59
2F：→ ysfang623: 素晚一点再下 01/03 17:59
3F：→ xxtomnyxx: 你的「筛」指的单纯用药杀还是有挑从1颗细胞长出的细胞 01/03 21:22
4F：→ xxtomnyxx: 群把它分离出来单独培养？ 01/03 21:22
5F：→ xxtomnyxx: 你用的 vector 是什麽？ pEF1 吗？用 dual-promoter去 01/03 21:23
6F：→ xxtomnyxx: 分别表现 GOI 和抗药基因的vector的确会有GOI的promote 01/03 21:24
7F：→ xxtomnyxx: r被关掉了但抗药基因的promoter仍持续表现的问题 01/03 21:24
8F：推 showwhale: 我们以前也遇过这种事 当时解决方法就是sorting 03/01 11:35