作者BroUNotCool (老兄你不酷喔)
看板Biotech
標題[求救] 細胞培養問題
時間Fri Sep 8 15:39:50 2023
想問板上各位大師
小弟日前在養 fibroblast
但是一顆細胞體積大
種細胞的時候種不了這麼多
6well 裡面大概只能種 1x10^5個
（太多會爆掉）
但是收細胞的時候protein跟RNA濃度很低
想問有什麼方法可以解決嗎
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1F：推 darrenyo: 那就種6公分或10公分盤啊 09/08 17:27
2F：推 maurice9325: 樓上正解。另外濃度看甚麼實驗要用的，收太多最後也 09/09 21:08
3F：→ maurice9325: 是沒用丟冰箱，然後……沒有然後了。 09/09 21:08
4F：推 florasflanaa: 同上，量不夠就多養一些，加大面積加大盤數都可 09/11 01:14
5F：→ florasflanaa: 以，另外問一下total protein量呢？也有可能是你 09/11 01:14
6F：→ florasflanaa: lysis buffer加太多 09/11 01:14
7F：→ untilnow: 一盤不夠, 你有沒有種兩盤 09/11 09:56
8F：推 leptoneta: 用10cm盤子養 6well不是用來養細胞抽核酸或蛋白的 09/11 11:56
9F：→ blence: 別亂教,6well是transfection reagent常用來示範、抽取RNA 09/11 12:33
10F：→ blence: 跟蛋白進行分析的範例,自覺得細胞不夠調整大小就好 09/11 12:35
11F：→ xxtomnyxx: 在我這裡 24-well 才是常態，抽RNA做qPCR、抽蛋白質做 09/11 16:10
12F：→ xxtomnyxx: western 也沒什麼問題。種多少多大盤本來就是看細胞種 09/11 16:11
13F：→ xxtomnyxx: 類，沒有什麼 dish 或 plate 不是拿來養細胞抽核酸或蛋 09/11 16:12
14F：→ xxtomnyxx: 白這種事 09/11 16:12
15F：推 maurice9325: 需求量取決於實驗。以QPCR來說，1 ug的total RNA翻 09/12 11:59
16F：→ maurice9325: 成cDNA再做QPCR，全部做完手會軟到不行，所以收太多 09/12 11:59
17F：→ maurice9325: 剩下來的也是浪費。Protein lysate for WB 1-20 tota 09/12 11:59
18F：→ maurice9325: l protein per well, 除非做IP才可能需要0.5-1 mg。f 09/12 11:59
19F：→ maurice9325: ibroblast也不是什麼特別難搞的細胞，所以問題可能在 09/12 11:59
20F：→ maurice9325: 於不知道需要多少或是稀釋太稀。 09/12 11:59
21F：推 agagy: 身為實驗人員，提問也不先講實驗方法跟所謂濃度太低是多少? 09/22 21:25
22F：→ agagy: 樓上人都太好了吧 09/22 21:26
23F：→ agagy: 這樣誰知道是哪一步出問題 09/22 21:32
24F：→ agagy: 而且光fibroblast種1X10^5 會爆掉就很怪 09/22 21:34
25F：→ agagy: 看需求密度而定一個6wellplate的well收到2-3X10^5應該OK 09/22 21:34
26F：→ agagy: 抽protein或RNA綽綽有餘 09/22 21:36
27F：→ agagy: 實驗方法跟目的仔細寫出來，這邊一堆厲害的人才幫的到你 09/22 21:37
28F：推 best0329: 如果細胞狀況一切正常，這個細胞數下收起來還會不夠做 09/23 15:44
29F：→ best0329: 可能的原因就是lysis不完全 09/23 15:44
30F：推 greatime: 連RNA濃度都很低感覺就是細胞數不足耶 真的資訊太少 種 09/23 20:37
31F：→ greatime: 超過1x10^5會爆掉也很難而理解 09/23 20:37
32F：→ florasflanaa: RNA濃度很低會不會是污染嚴重降解 09/25 20:18
33F：→ florasflanaa: 不過猜測也沒用啊，畢竟原po 問完問題就神隱惹 09/25 20:20