作者BroUNotCool (老兄你不酷喔)
看板Biotech
标题[求救] 细胞培养问题
时间Fri Sep 8 15:39:50 2023
想问板上各位大师
小弟日前在养 fibroblast
但是一颗细胞体积大
种细胞的时候种不了这麽多
6well 里面大概只能种 1x10^5个
（太多会爆掉）
但是收细胞的时候protein跟RNA浓度很低
想问有什麽方法可以解决吗
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1F：推 darrenyo: 那就种6公分或10公分盘啊 09/08 17:27
2F：推 maurice9325: 楼上正解。另外浓度看甚麽实验要用的，收太多最後也 09/09 21:08
3F：→ maurice9325: 是没用丢冰箱，然後……没有然後了。 09/09 21:08
4F：推 florasflanaa: 同上，量不够就多养一些，加大面积加大盘数都可 09/11 01:14
5F：→ florasflanaa: 以，另外问一下total protein量呢？也有可能是你 09/11 01:14
6F：→ florasflanaa: lysis buffer加太多 09/11 01:14
7F：→ untilnow: 一盘不够, 你有没有种两盘 09/11 09:56
8F：推 leptoneta: 用10cm盘子养 6well不是用来养细胞抽核酸或蛋白的 09/11 11:56
9F：→ blence: 别乱教,6well是transfection reagent常用来示范、抽取RNA 09/11 12:33
10F：→ blence: 跟蛋白进行分析的范例,自觉得细胞不够调整大小就好 09/11 12:35
11F：→ xxtomnyxx: 在我这里 24-well 才是常态，抽RNA做qPCR、抽蛋白质做 09/11 16:10
12F：→ xxtomnyxx: western 也没什麽问题。种多少多大盘本来就是看细胞种 09/11 16:11
13F：→ xxtomnyxx: 类，没有什麽 dish 或 plate 不是拿来养细胞抽核酸或蛋 09/11 16:12
14F：→ xxtomnyxx: 白这种事 09/11 16:12
15F：推 maurice9325: 需求量取决於实验。以QPCR来说，1 ug的total RNA翻 09/12 11:59
16F：→ maurice9325: 成cDNA再做QPCR，全部做完手会软到不行，所以收太多 09/12 11:59
17F：→ maurice9325: 剩下来的也是浪费。Protein lysate for WB 1-20 tota 09/12 11:59
18F：→ maurice9325: l protein per well, 除非做IP才可能需要0.5-1 mg。f 09/12 11:59
19F：→ maurice9325: ibroblast也不是什麽特别难搞的细胞，所以问题可能在 09/12 11:59
20F：→ maurice9325: 於不知道需要多少或是稀释太稀。 09/12 11:59
21F：推 agagy: 身为实验人员，提问也不先讲实验方法跟所谓浓度太低是多少? 09/22 21:25
22F：→ agagy: 楼上人都太好了吧 09/22 21:26
23F：→ agagy: 这样谁知道是哪一步出问题 09/22 21:32
24F：→ agagy: 而且光fibroblast种1X10^5 会爆掉就很怪 09/22 21:34
25F：→ agagy: 看需求密度而定一个6wellplate的well收到2-3X10^5应该OK 09/22 21:34
26F：→ agagy: 抽protein或RNA绰绰有余 09/22 21:36
27F：→ agagy: 实验方法跟目的仔细写出来，这边一堆厉害的人才帮的到你 09/22 21:37
28F：推 best0329: 如果细胞状况一切正常，这个细胞数下收起来还会不够做 09/23 15:44
29F：→ best0329: 可能的原因就是lysis不完全 09/23 15:44
30F：推 greatime: 连RNA浓度都很低感觉就是细胞数不足耶 真的资讯太少 种 09/23 20:37
31F：→ greatime: 超过1x10^5会爆掉也很难而理解 09/23 20:37
32F：→ florasflanaa: RNA浓度很低会不会是污染严重降解 09/25 20:18
33F：→ florasflanaa: 不过猜测也没用啊，毕竟原po 问完问题就神隐惹 09/25 20:20