作者jonsauwi (JBY)
看板Biotech
標題[求救] 放大現有cDNA library
時間Mon Sep 4 11:50:50 2023
最近要做一個實驗，需要購買comercial human cDNA library進行gene放大的實驗，
因為需要放大的gene非常多（有快要200組的primer要做），
一般買來的cDNA library大多只能做20 ~ 40 reaction，還要考慮失敗的問題，
由於cDNA library真的很貴，要多買幾管的話會非常花錢，
請問是否有可能用PCR的方法先將library放大，且仍保留library的diversity呢？
雖然知道從RNA反轉成cDNA的方法，但是不知道是否可以用在放大cDNA上...
非常感謝！
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1F：→ blence: 這library不是在vector上嗎？ 09/04 22:09
2F：→ jonsauwi: 看DATASHEET是RT轉完的產物，不是在Vector裡的樣子...y 09/05 08:12
3F：推 Ice9: 小心實驗結果會失真。你們論文上也不能省掉這一步沒寫。 09/05 10:34
4F：→ Ice9: 是否能考慮適量稀釋原液？ 09/05 10:55
5F：→ blence: cDNA pool如果不是接在vector就稱做library有點怪,純粹RT 09/05 11:02
6F：→ blence: 就是cDNA,如同一般不會說拿cDNA library做qPCR看表現量 09/05 11:06
7F：→ blence: 不知道你的目的,如果是要拿到full-length clone,稀釋跟自 09/05 11:09
8F：→ blence: 行放大都不是好辦法 09/05 11:09
9F：→ jonsauwi: 原來如此...我們現在可能會再去找看看是否有直接接在 09/05 11:12
10F：→ jonsauwi: vector裡可自行放大的library... 09/05 11:13
11F：→ jonsauwi: 我們是要從這library裡拿到full-length clone的 09/05 11:13
12F：→ blence: 就這個狀況我會multi-plex,或真的花錢買大量的折扣 09/05 11:13
13F：→ jonsauwi: 感謝樓上，我再研究看看並跟老闆討論是要用那種方案... 09/05 11:18
14F：推 lemonteas: 好奇為什麼不從RNA開始？ 09/05 18:39
15F：→ xxtomnyxx: RNA樣本哪來啊XDDD 人類的耶XD 09/05 21:02
16F：→ lemonteas: 抽血.醫院檢體？ 09/06 12:19
17F：推 Ianthegood: 如果是RT產物 5' ssDNA linker ligation -> polyT PCR 09/06 14:44
18F：→ Ianthegood: ? 09/06 14:44
19F：→ blence: 我猜原po的應該只是tissue-specific cDNAs,就像下面這種, 09/06 22:07
20F：→ blence: ScienCell Research Laboratories #1104 09/06 22:07
21F：→ blence: Human Brain Vascular Smooth Muscle Cell cDNA 09/06 22:07
22F：→ blence: 才會覺得只有20~40 reaction可用 09/06 22:08
23F：→ blence: library應該像Human Embryonic Stem Cell Primary cDNA 09/06 22:09
24F：→ blence: Library, XpressBio #12260-P這種vector形式的,可用上千次 09/06 22:11