作者jonsauwi (JBY)
看板Biotech
标题[求救] 放大现有cDNA library
时间Mon Sep 4 11:50:50 2023
最近要做一个实验，需要购买comercial human cDNA library进行gene放大的实验，
因为需要放大的gene非常多（有快要200组的primer要做），
一般买来的cDNA library大多只能做20 ~ 40 reaction，还要考虑失败的问题，
由於cDNA library真的很贵，要多买几管的话会非常花钱，
请问是否有可能用PCR的方法先将library放大，且仍保留library的diversity呢？
虽然知道从RNA反转成cDNA的方法，但是不知道是否可以用在放大cDNA上...
非常感谢！
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1F：→ blence: 这library不是在vector上吗？ 09/04 22:09
2F：→ jonsauwi: 看DATASHEET是RT转完的产物，不是在Vector里的样子...y 09/05 08:12
3F：推 Ice9: 小心实验结果会失真。你们论文上也不能省掉这一步没写。 09/05 10:34
4F：→ Ice9: 是否能考虑适量稀释原液？ 09/05 10:55
5F：→ blence: cDNA pool如果不是接在vector就称做library有点怪,纯粹RT 09/05 11:02
6F：→ blence: 就是cDNA,如同一般不会说拿cDNA library做qPCR看表现量 09/05 11:06
7F：→ blence: 不知道你的目的,如果是要拿到full-length clone,稀释跟自 09/05 11:09
8F：→ blence: 行放大都不是好办法 09/05 11:09
9F：→ jonsauwi: 原来如此...我们现在可能会再去找看看是否有直接接在 09/05 11:12
10F：→ jonsauwi: vector里可自行放大的library... 09/05 11:13
11F：→ jonsauwi: 我们是要从这library里拿到full-length clone的 09/05 11:13
12F：→ blence: 就这个状况我会multi-plex,或真的花钱买大量的折扣 09/05 11:13
13F：→ jonsauwi: 感谢楼上，我再研究看看并跟老板讨论是要用那种方案... 09/05 11:18
14F：推 lemonteas: 好奇为什麽不从RNA开始？ 09/05 18:39
15F：→ xxtomnyxx: RNA样本哪来啊XDDD 人类的耶XD 09/05 21:02
16F：→ lemonteas: 抽血.医院检体？ 09/06 12:19
17F：推 Ianthegood: 如果是RT产物 5' ssDNA linker ligation -> polyT PCR 09/06 14:44
18F：→ Ianthegood: ? 09/06 14:44
19F：→ blence: 我猜原po的应该只是tissue-specific cDNAs,就像下面这种, 09/06 22:07
20F：→ blence: ScienCell Research Laboratories #1104 09/06 22:07
21F：→ blence: Human Brain Vascular Smooth Muscle Cell cDNA 09/06 22:07
22F：→ blence: 才会觉得只有20~40 reaction可用 09/06 22:08
23F：→ blence: library应该像Human Embryonic Stem Cell Primary cDNA 09/06 22:09
24F：→ blence: Library, XpressBio #12260-P这种vector形式的,可用上千次 09/06 22:11