作者sr00rz (打我ㄚ笨蛋)
看板Biotech
標題[求救] Western blot訊號破碎問題請益
時間Fri Apr 28 10:41:44 2023
各位前輩先進大家好
我跑完Western後用ponceau S染色後發現蛋白無法順利的轉印到PVDF上
像是卡了很多小氣泡的感覺 如下圖
https://i.imgur.com/TOfchPe.jpg
最後呈色時那些轉印不完全的區域訊號就會變得破碎
希望有前輩能幫我解決這個問題 謝謝!!
SDS-PAEG電泳條件：70v, 2 hr 20 min
轉漬條件：100v, 1.5 hr, 電流0.2A~0.3A
protein 10 ug
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1F：→ TrueTomny: 就….泡泡啊，filter paper、PVDF和gel這三者之間有氣 04/28 11:27
2F：→ TrueTomny: 泡，有些很小的氣泡在組裝的時候可能看不到，但是一通 04/28 11:27
3F：→ TrueTomny: 電，溫度升高氣體溶解度降低加上體積膨脹就出現了，有 04/28 11:27
4F：→ TrueTomny: 加SDS會更嚴重，尤其你用100 V，轉完應該很熱吧？ 04/28 11:27
5F：→ Bows: 同意樓上，這就是你疊三明治時的氣泡沒趕掉，這圖應該是是g 04/28 12:45
6F：→ Bows: el跟PVDF之間的氣泡的影響，請在疊三明治時多看幾眼，或請 04/28 12:45
7F：→ Bows: 學長姐幫忙檢查 04/28 12:45
8F：推 leptoneta: 中間氣泡沒弄掉啊 04/28 13:40
9F：推 jabari: 先去練桿蔥油餅 04/28 13:44
10F：推 joy2139: 有泡泡啦 滾輪多滾幾次 同一方向滾 04/29 23:53
11F：推 Ianthegood: 以上 還有疊起來進tank灌buffer後整個tank往桌上平平 04/30 16:32
12F：→ Ianthegood: 拍 拍到沒有氣泡再從sandwich跑出來 04/30 16:32
13F：→ xxtomnyxx: 我個人不推薦用桿的就是了，有些 gel 桿一桿會變形 05/01 01:16
14F：推 maurice9325: 如果是PVDF, 甲醇活化後先用fresh trans buffer rins 05/09 17:44
15F：→ maurice9325: e一下，轉個幾分鐘，可以降低小氣泡產生。 05/09 17:44
16F：推 aa08175: 歐歐 08/08 10:51