作者sr00rz (打我ㄚ笨蛋)
看板Biotech
标题[求救] Western blot讯号破碎问题请益
时间Fri Apr 28 10:41:44 2023
各位前辈先进大家好
我跑完Western後用ponceau S染色後发现蛋白无法顺利的转印到PVDF上
像是卡了很多小气泡的感觉 如下图
https://i.imgur.com/TOfchPe.jpg
最後呈色时那些转印不完全的区域讯号就会变得破碎
希望有前辈能帮我解决这个问题 谢谢!!
SDS-PAEG电泳条件：70v, 2 hr 20 min
转渍条件：100v, 1.5 hr, 电流0.2A~0.3A
protein 10 ug
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1F：→ TrueTomny: 就….泡泡啊，filter paper、PVDF和gel这三者之间有气 04/28 11:27
2F：→ TrueTomny: 泡，有些很小的气泡在组装的时候可能看不到，但是一通 04/28 11:27
3F：→ TrueTomny: 电，温度升高气体溶解度降低加上体积膨胀就出现了，有 04/28 11:27
4F：→ TrueTomny: 加SDS会更严重，尤其你用100 V，转完应该很热吧？ 04/28 11:27
5F：→ Bows: 同意楼上，这就是你叠三明治时的气泡没赶掉，这图应该是是g 04/28 12:45
6F：→ Bows: el跟PVDF之间的气泡的影响，请在叠三明治时多看几眼，或请 04/28 12:45
7F：→ Bows: 学长姐帮忙检查 04/28 12:45
8F：推 leptoneta: 中间气泡没弄掉啊 04/28 13:40
9F：推 jabari: 先去练杆葱油饼 04/28 13:44
10F：推 joy2139: 有泡泡啦 滚轮多滚几次 同一方向滚 04/29 23:53
11F：推 Ianthegood: 以上 还有叠起来进tank灌buffer後整个tank往桌上平平 04/30 16:32
12F：→ Ianthegood: 拍 拍到没有气泡再从sandwich跑出来 04/30 16:32
13F：→ xxtomnyxx: 我个人不推荐用杆的就是了，有些 gel 杆一杆会变形 05/01 01:16
14F：推 maurice9325: 如果是PVDF, 甲醇活化後先用fresh trans buffer rins 05/09 17:44
15F：→ maurice9325: e一下，转个几分钟，可以降低小气泡产生。 05/09 17:44
16F：推 aa08175: 欧欧 08/08 10:51