作者song4231 (Inequality_c)
看板Biotech
標題[求救] 如何得知plasmid有被抽成功？？
時間Tue Nov 9 10:17:58 2021
各位大大好，小妹是小研究生一枚
上研究所後發現自己的能力實在太不足夠（只能努力學習）
但實驗室學長姐真的太恐怖
只好上來求救
想請問各位大大：
Q:我要如何知道我抽的plasmid有沒有成功?
我的老闆告訴我去跑膠，然後順便一欄跑Genomic DNA
一欄跑plasmid DNA 順便測試條件看看後續實驗的條件要用多少濃度來跑
可是沒有跑PCR的狀態下，沒有用primers去夾會有產物嗎？
還是我要ligation過才可以去跑??
謝謝大家
不好意思可能問了一個白痴問題
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1F：推 jabari: 去看addgene的plasmid 101系列 11/09 12:53
2F：推 satantaco: 當然會有產物 Plasmid依然是核酸 當然跑膠就會看得到 11/09 14:21
3F：→ satantaco: 需要留意的是 plasmid因為結構關係 跑的速率會不一樣 11/09 14:22
4F：→ satantaco: 因此如果跟標準品對照相對位置 會有一些大小的落差 11/09 14:23
5F：→ satantaco: 不過實驗上需要留意 你的plasmid有多大size 電泳要跑 11/09 14:24
6F：→ satantaco: 多久 跑太短 位置會不會太上面 不容易看 跑太長會不會 11/09 14:25
7F：→ satantaco: 跑到跳海 需要做一些預估 11/09 14:26
8F：→ satantaco: 不過這相對也跟膠的濃度有關 去google找一下原理 11/09 14:27
9F：推 monkey60391: plasmid用kit抽出來的濃度很高， 11/09 16:09
10F：→ monkey60391: 所以不用像DNA片段要再透過PCR放大才看得到 11/09 16:09
11F：→ monkey60391: 通常plasmid跑膠應該會用限制酶切一兩刀 11/09 16:09
12F：→ monkey60391: 去看片段大小有沒有符合預期吧 11/09 16:09
13F：→ Ice9: 學長姐恐怖是什麼意思？再恐怖還是要盧一盧啊，這關乎你的 11/09 16:15
14F：→ Ice9: 權益和……畢業。 11/09 16:15
15F：推 Ice9: 另外，你老闆說的順便跑 gDNA應該是其他或後續實驗要用到的 11/09 16:18
16F：→ Ice9: ，要先弄清楚是不是沒測過濃度或放太久了。 11/09 16:18
17F：推 huuban: 有辦法先測濃度嗎? 通常是用限制酶切成線性再跑膠吧 11/10 23:11
18F：推 ss0545202: 通常是用限制酶切完跑膠看band大小有沒有符合 但首先 11/11 23:56
19F：→ ss0545202: 你要有質體的map 這樣才知道要用哪個限制酶切 通常找 11/11 23:56
20F：→ ss0545202: 只有1-3個切位的酵素來切 11/11 23:56
21F：→ ss0545202: addgene的blog很多資訊可以看 或找current protocol看 11/11 23:58
22F：→ ss0545202: 一開始我也是看那些自己學著做 11/11 23:58
23F：推 agagy: 就像樓上說的，沒有用限制酶確認過都不可信 11/14 02:45
24F：→ song4231: 謝謝樓上各位大大的指教，小妹受教了，的確是需要利用 11/25 15:21
25F：→ song4231: 限制酶切過才會好辨認（我的理解是這樣），所以之前很 11/25 15:21
26F：→ song4231: 糾結為什麼跑不出來（只跑plasmid), 謝謝大家！ 11/25 15:21