作者song4231 (Inequality_c)
看板Biotech
标题[求救] 如何得知plasmid有被抽成功？？
时间Tue Nov 9 10:17:58 2021
各位大大好，小妹是小研究生一枚
上研究所後发现自己的能力实在太不足够（只能努力学习）
但实验室学长姐真的太恐怖
只好上来求救
想请问各位大大：
Q:我要如何知道我抽的plasmid有没有成功?
我的老板告诉我去跑胶，然後顺便一栏跑Genomic DNA
一栏跑plasmid DNA 顺便测试条件看看後续实验的条件要用多少浓度来跑
可是没有跑PCR的状态下，没有用primers去夹会有产物吗？
还是我要ligation过才可以去跑??
谢谢大家
不好意思可能问了一个白痴问题
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1F：推 jabari: 去看addgene的plasmid 101系列 11/09 12:53
2F：推 satantaco: 当然会有产物 Plasmid依然是核酸 当然跑胶就会看得到 11/09 14:21
3F：→ satantaco: 需要留意的是 plasmid因为结构关系 跑的速率会不一样 11/09 14:22
4F：→ satantaco: 因此如果跟标准品对照相对位置 会有一些大小的落差 11/09 14:23
5F：→ satantaco: 不过实验上需要留意 你的plasmid有多大size 电泳要跑 11/09 14:24
6F：→ satantaco: 多久 跑太短 位置会不会太上面 不容易看 跑太长会不会 11/09 14:25
7F：→ satantaco: 跑到跳海 需要做一些预估 11/09 14:26
8F：→ satantaco: 不过这相对也跟胶的浓度有关 去google找一下原理 11/09 14:27
9F：推 monkey60391: plasmid用kit抽出来的浓度很高， 11/09 16:09
10F：→ monkey60391: 所以不用像DNA片段要再透过PCR放大才看得到 11/09 16:09
11F：→ monkey60391: 通常plasmid跑胶应该会用限制酶切一两刀 11/09 16:09
12F：→ monkey60391: 去看片段大小有没有符合预期吧 11/09 16:09
13F：→ Ice9: 学长姐恐怖是什麽意思？再恐怖还是要卢一卢啊，这关乎你的 11/09 16:15
14F：→ Ice9: 权益和……毕业。 11/09 16:15
15F：推 Ice9: 另外，你老板说的顺便跑 gDNA应该是其他或後续实验要用到的 11/09 16:18
16F：→ Ice9: ，要先弄清楚是不是没测过浓度或放太久了。 11/09 16:18
17F：推 huuban: 有办法先测浓度吗? 通常是用限制酶切成线性再跑胶吧 11/10 23:11
18F：推 ss0545202: 通常是用限制酶切完跑胶看band大小有没有符合 但首先 11/11 23:56
19F：→ ss0545202: 你要有质体的map 这样才知道要用哪个限制酶切 通常找 11/11 23:56
20F：→ ss0545202: 只有1-3个切位的酵素来切 11/11 23:56
21F：→ ss0545202: addgene的blog很多资讯可以看 或找current protocol看 11/11 23:58
22F：→ ss0545202: 一开始我也是看那些自己学着做 11/11 23:58
23F：推 agagy: 就像楼上说的，没有用限制酶确认过都不可信 11/14 02:45
24F：→ song4231: 谢谢楼上各位大大的指教，小妹受教了，的确是需要利用 11/25 15:21
25F：→ song4231: 限制酶切过才会好辨认（我的理解是这样），所以之前很 11/25 15:21
26F：→ song4231: 纠结为什麽跑不出来（只跑plasmid), 谢谢大家！ 11/25 15:21