作者Poke0605 (台中彭于晏)
看板Biotech
標題[求救] RFLP 遇到snp 該如果確定
時間Mon Oct 25 15:44:38 2021
餓死抬頭啦
小弟目前在做RFLP發現有一段序列不管怎麼切原本的template都還是在（但也看出來有切
動）
那去看定序結果的訊號圖，訊號都是完整的
小弟在懷疑有沒有可能是有snp 的狀況
想問各位大大有沒有遇過類似的情況或是說知道該如何證明那段有snp
感恩各位祝大家實驗順利
最後附上結果圖給大家參考
圖上可以看到100-200b.p.有切下來的產物
但是300-400b.p.原本的template依然存在
酵素效率為10U，template為100ng，作用12小時
https://i.imgur.com/kXo6Tqg.jpg
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1F：推 r03b43022: 知道序列的話可以設計taqman probe去做validation 10/25 16:48
2F：→ r03b43022: 以及切不動不知道有沒有排除甲基化的可能 10/25 16:49
3F：→ blence: 為什麼看定序結果是完整的,會去聯想到SNP的狀況 10/25 18:30
4F：→ xxtomnyxx: 你的 template 是怎麼來的？PCR？ 10/25 19:52
5F：→ xxtomnyxx: 另外，一般我遇到這種狀況，首先考慮酵素壞掉了，手上 10/25 21:47
6F：→ xxtomnyxx: 有plasmid有這個切位的拿來切切看？ 10/25 21:47
7F：→ Ice9: 你的 template只有一個切位，然後下 10U切100ng，12小時？ 10/26 16:42
8F：→ Ice9: 這是有多難切 10/26 16:42
9F：→ alextu870719: 你沒切完的部分其實蠻多的，定序結果也都很清楚，我 10/27 02:46
10F：→ alextu870719: 覺得SNP就不太可能，你可能要考慮酵素會不會壞了， 10/27 02:46
11F：→ alextu870719: 或是你的template不夠乾淨 10/27 02:46
12F：推 serotoninUP: 切膠 純化 定序 10/27 21:34
13F：→ serotoninUP: 但覺得應該是酵素活性沒100% 10/27 21:34