作者Poke0605 (台中彭于晏)
看板Biotech
标题[求救] RFLP 遇到snp 该如果确定
时间Mon Oct 25 15:44:38 2021
饿死抬头啦
小弟目前在做RFLP发现有一段序列不管怎麽切原本的template都还是在(但也看出来有切
动)
那去看定序结果的讯号图,讯号都是完整的
小弟在怀疑有没有可能是有snp 的状况
想问各位大大有没有遇过类似的情况或是说知道该如何证明那段有snp
感恩各位祝大家实验顺利
最後附上结果图给大家参考
图上可以看到100-200b.p.有切下来的产物
但是300-400b.p.原本的template依然存在
酵素效率为10U,template为100ng,作用12小时
https://i.imgur.com/kXo6Tqg.jpg
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1F:推 r03b43022: 知道序列的话可以设计taqman probe去做validation 10/25 16:48
2F:→ r03b43022: 以及切不动不知道有没有排除甲基化的可能 10/25 16:49
3F:→ blence: 为什麽看定序结果是完整的,会去联想到SNP的状况 10/25 18:30
4F:→ xxtomnyxx: 你的 template 是怎麽来的?PCR? 10/25 19:52
5F:→ xxtomnyxx: 另外,一般我遇到这种状况,首先考虑酵素坏掉了,手上 10/25 21:47
6F:→ xxtomnyxx: 有plasmid有这个切位的拿来切切看? 10/25 21:47
7F:→ Ice9: 你的 template只有一个切位,然後下 10U切100ng,12小时? 10/26 16:42
8F:→ Ice9: 这是有多难切 10/26 16:42
9F:→ alextu870719: 你没切完的部分其实蛮多的,定序结果也都很清楚,我 10/27 02:46
10F:→ alextu870719: 觉得SNP就不太可能,你可能要考虑酵素会不会坏了, 10/27 02:46
11F:→ alextu870719: 或是你的template不够乾净 10/27 02:46
12F:推 serotoninUP: 切胶 纯化 定序 10/27 21:34
13F:→ serotoninUP: 但觉得应该是酵素活性没100% 10/27 21:34