作者MLSHBen (酷喔)
看板Biotech
標題Re: [求救] 點突變primer insert
時間Thu Apr 1 20:31:12 2021
想回的有點多乾脆直接回文
之前跟您一樣用KOD (PLUS)
當時同時做10個point mutation clone 結果只有2個clone有正常點突變
其他的clone都是跟您一樣的問題
詢問比較熟的同仁 說可能跟primer有關 (poly A之類的導致primer dimer之類的我忘了)
說也有可能跟cycle數有關 可能cycle數太高導致錯誤 (當初調到30)
後來先嘗試改用別的polymerase (PrimeSTAR GXL) 同時降低cycle數 (降到16) 但primer一樣
就沒再發生這問題了
給您做參考
之前在這個板上受到一些幫助
希望我微薄的經驗也能或多或少幫到您
祝實驗順利~
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