作者shofu0913 (Shofu)
看板Biotech
標題[求救] 點突變primer insert
時間Sat Mar 27 16:34:54 2021
如題
最近在做4株backbone相同
不同位置的點突變
但transform後colony的定序結果
在應該突變的位置都會有primer的插入且有長有短
一個點突變做了2 3次
每次都送3 4顆都有相同結果
不知道有沒有人遇過並如何解決
感謝
P.S ploymerase用的是KOD
Competent cell 用的是DH5a
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1F：→ shofu0913: 補充一下 03/27 16:38
2F：→ shofu0913: Primer大概33～35bp 03/27 16:38
3F：→ shofu0913: GC content大約都50% 03/27 16:38
4F：→ blence: 是不是最後有加ligase,造成primer insertion? 03/28 01:42
5F：→ blence: 如果是complementary primer,是對應到ligation-free的SDM 03/28 01:43
6F：→ Ice9: 有長有短是指 primers的量嗎？ 03/28 17:27
7F：→ shofu0913: b大 確實有加ligase 下次試試看ligase free的 03/28 19:13
8F：→ shofu0913: 覺得奇怪的點是因為 03/28 19:13
9F：→ shofu0913: 實驗室protocol都是這樣做的 03/28 19:13
10F：→ shofu0913: 我先前也做過類似的實驗也都有成功 03/28 19:13
11F：→ shofu0913: 有長有短是指primer insert的重複次數 03/28 19:13
12F：→ blence: 跟早期比現在SDM有各種改變了,要不要加ligase 03/28 22:29
13F：→ blence: 要看你們的primer是對應哪種protocol的設計 03/28 22:30
14F：→ Ice9: 那 primer orientation都一樣嗎？還是有特殊規律？ 03/28 22:46
15F：推 osla30: 是BlacktoBack還是QuikChange方式？ 03/29 08:58
16F：→ osla30: 打錯，是BacktoBack 03/29 08:58