作者shofu0913 (Shofu)
看板Biotech
标题[求救] 点突变primer insert
时间Sat Mar 27 16:34:54 2021
如题
最近在做4株backbone相同
不同位置的点突变
但transform後colony的定序结果
在应该突变的位置都会有primer的插入且有长有短
一个点突变做了2 3次
每次都送3 4颗都有相同结果
不知道有没有人遇过并如何解决
感谢
P.S ploymerase用的是KOD
Competent cell 用的是DH5a
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1F:→ shofu0913: 补充一下 03/27 16:38
2F:→ shofu0913: Primer大概33~35bp 03/27 16:38
3F:→ shofu0913: GC content大约都50% 03/27 16:38
4F:→ blence: 是不是最後有加ligase,造成primer insertion? 03/28 01:42
5F:→ blence: 如果是complementary primer,是对应到ligation-free的SDM 03/28 01:43
6F:→ Ice9: 有长有短是指 primers的量吗? 03/28 17:27
7F:→ shofu0913: b大 确实有加ligase 下次试试看ligase free的 03/28 19:13
8F:→ shofu0913: 觉得奇怪的点是因为 03/28 19:13
9F:→ shofu0913: 实验室protocol都是这样做的 03/28 19:13
10F:→ shofu0913: 我先前也做过类似的实验也都有成功 03/28 19:13
11F:→ shofu0913: 有长有短是指primer insert的重复次数 03/28 19:13
12F:→ blence: 跟早期比现在SDM有各种改变了,要不要加ligase 03/28 22:29
13F:→ blence: 要看你们的primer是对应哪种protocol的设计 03/28 22:30
14F:→ Ice9: 那 primer orientation都一样吗?还是有特殊规律? 03/28 22:46
15F:推 osla30: 是BlacktoBack还是QuikChange方式? 03/29 08:58
16F:→ osla30: 打错,是BacktoBack 03/29 08:58