作者steve42125 (Shiburin)
看板Biotech
標題[求救] DMSO溶解藥物的二次稀釋?
時間Sat Apr 25 14:33:41 2020
標題這樣打不知道會不會讓人誤會
問題是這樣的
最近想買一個5mg的Antagonist
Datasheet上提供的溶劑是用DMSO這邊沒什麼問題
以13.21ml的DMSO配置成1mM的溶液
可實際上我真正後續會用的working concentration
大概會是nM的範圍
於是我希望能將配置好的1mM溶液再更加稀釋並分裝
(想說配成20uM)
可是我實在不知道在這個在稀釋後分裝的過程我應該用什麼樣的溶劑才好
是繼續用DMSO嗎？
這個問題可能會有點蠢......
初來乍到 還請各位多多指教QQ
另外想請問
實驗室有一罐放了有點久
蓋子裂開但近乎全滿的DMSO(和現在用來凍細胞的是同一種)
覺得丟了很可惜 但又怕污染
想說過個filter繼續用 不知道合不合適?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 120.126.49.54 (臺灣)
※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1587796423.A.E87.html
1F：→ Qaaaa: 如用DMSO稀釋你要看最後的working conc.是否會超過細胞毒性 04/25 14:41
2F：→ Qaaaa: 容許的DMSO濃度 如果是要做細胞試驗的話 04/25 14:41
確實是 也就是說也不能把藥物泡的太稀
使得最後在配到medium時DMSO的濃度過高而影響細胞囉?
所以我才想說further dilution能不能用PBS之類的 又怕影響藥物
※ 編輯: steve42125 (120.126.49.54 臺灣), 04/25/2020 14:55:50
※ 編輯: steve42125 (120.126.49.54 臺灣), 04/25/2020 14:56:20
※ 編輯: steve42125 (120.126.49.54 臺灣), 04/25/2020 15:00:16
3F：推 perdedor: 一般來說，細胞實驗可以容許有0.1%的DMSO，但你也要用0. 04/25 16:03
4F：→ perdedor: 1%DMSO做一個vehicle control。最好還能做一個0.1%的 04/25 16:04
5F：→ perdedor: cytotoxicity test。所以你算算就知道stock該配多濃了。 04/25 16:04
6F：→ perdedor: 然後，不要用filter過濾DMSO一般filter耐不住。有點擔 04/25 16:05
7F：→ perdedor: 心你的實驗因為這些問題很基本，你們實驗室裡沒有更有經 04/25 16:05
8F：→ perdedor: 驗的人可以請教嗎? 04/25 16:05
9F：推 perdedor: 如果只是蓋子裂開(小裂)而且DMSO是收在culture room的櫃 04/25 16:08
10F：→ perdedor: 子裡，我會繼續用啦。畢竟DMSO蠻毒的。就看你個人多在意 04/25 16:09
謝謝您的完整推 目前實驗室確實沒有人可以請教了QQ
確實有耳聞DMSO對細胞的高毒性
這部分確實我有打算先做個測試
而後在正式實驗時帶一個您說的vehicle control
再次謝謝經驗分享 感謝！
※ 編輯: steve42125 (120.126.49.54 臺灣), 04/25/2020 17:02:07
11F：推 soend: DMSO可以用特殊材質的filter過濾，你可以問一下廠商，如果 04/25 20:29
意思是說 在回溶到1mM時一樣用DMSO 而後再用medium稀釋成20uM保存供後續實驗處理用囉？
12F：→ soend: 你實驗是細胞實驗，我的作法是稀釋在medium去做序列稀釋， 04/25 20:29
13F：→ soend: 當然還是要做DMSO的control 04/25 20:29
※ 編輯: steve42125 (223.137.183.135 臺灣), 04/25/2020 23:44:17
14F：推 perdedor: 我舉個例子好了…假設你用12-well種細胞，所以每一個 04/26 23:26
15F：→ perdedor: well有1 mL的medium。一般細胞藥理實驗，0.1%的DMSO是可 04/26 23:26
16F：→ perdedor: 接受的，因此你可以直接用pipette加1 uL溶於DMSO的 04/26 23:26
17F：→ perdedor: antagonist到每個well。假設你希望最終作用在細胞的濃 04/26 23:27
18F：→ perdedor: 濃度是20 nM好了，你stock就配antagonist, 20 uM in DMS 04/26 23:28
19F：→ perdedor: DMSO。如果希望DMSO只有0.05%。就配40 uM然後加0.5 uL ( 04/26 23:28
20F：→ perdedor: 你技術ok的話可以加得準)。既然你會有vehicle組別，就 04/26 23:29
21F：→ perdedor: 不必太擔心無法控制變因。除非你的antagonist水溶性不 04/26 23:29
22F：→ perdedor: 不錯，不然DMSO通常是最好的選擇。然後要溶於水的話， 04/26 23:30
23F：→ perdedor: 用水就可以了，不用加medium，反正你還是要做水的 vehic 04/26 23:30
24F：→ perdedor: cle (雖然加不加沒差)。 04/26 23:31
P大 真的很感謝你的解釋和舉例
我現在完全清楚我的Stock和後續Working時要怎麼製備了
真的很謝謝您！
※ 編輯: steve42125 (120.126.49.54 臺灣), 04/27/2020 11:07:29
25F：推 taya1991: 其實你可以乾脆用自己的細胞來試試看，比方會加100的 04/28 18:19
26F：→ taya1991: DMSO，那你就分一盤出來加加看會不會影響細胞，順便看看 04/28 18:20
27F：→ taya1991: 那罐蓋子裂開的DMSO會不會因此長菌~ 04/28 18:21
28F：→ taya1991: 當然，能買新的最好，也穩定，免得都沒長但突然最後一份 04/28 18:22
29F：→ taya1991: data長了...........要重做就欲哭無淚 04/28 18:22
30F：→ NKTcell: DMSO蓋子裂開最好不要再用了 濃度會改變 04/28 22:05
樓上兩位的建議確實也很有道理 我在強烈請求老師看看XD
※ 編輯: steve42125 (120.126.49.54 臺灣), 04/29/2020 10:44:16