作者steve42125 (Shiburin)
看板Biotech
标题[求救] DMSO溶解药物的二次稀释?
时间Sat Apr 25 14:33:41 2020
标题这样打不知道会不会让人误会
问题是这样的
最近想买一个5mg的Antagonist
Datasheet上提供的溶剂是用DMSO这边没什麽问题
以13.21ml的DMSO配置成1mM的溶液
可实际上我真正後续会用的working concentration
大概会是nM的范围
於是我希望能将配置好的1mM溶液再更加稀释并分装
(想说配成20uM)
可是我实在不知道在这个在稀释後分装的过程我应该用什麽样的溶剂才好
是继续用DMSO吗？
这个问题可能会有点蠢......
初来乍到 还请各位多多指教QQ
另外想请问
实验室有一罐放了有点久
盖子裂开但近乎全满的DMSO(和现在用来冻细胞的是同一种)
觉得丢了很可惜 但又怕污染
想说过个filter继续用 不知道合不合适?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 120.126.49.54 (台湾)
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1F：→ Qaaaa: 如用DMSO稀释你要看最後的working conc.是否会超过细胞毒性 04/25 14:41
2F：→ Qaaaa: 容许的DMSO浓度 如果是要做细胞试验的话 04/25 14:41
确实是 也就是说也不能把药物泡的太稀
使得最後在配到medium时DMSO的浓度过高而影响细胞罗?
所以我才想说further dilution能不能用PBS之类的 又怕影响药物
※ 编辑: steve42125 (120.126.49.54 台湾), 04/25/2020 14:55:50
※ 编辑: steve42125 (120.126.49.54 台湾), 04/25/2020 14:56:20
※ 编辑: steve42125 (120.126.49.54 台湾), 04/25/2020 15:00:16
3F：推 perdedor: 一般来说，细胞实验可以容许有0.1%的DMSO，但你也要用0. 04/25 16:03
4F：→ perdedor: 1%DMSO做一个vehicle control。最好还能做一个0.1%的 04/25 16:04
5F：→ perdedor: cytotoxicity test。所以你算算就知道stock该配多浓了。 04/25 16:04
6F：→ perdedor: 然後，不要用filter过滤DMSO一般filter耐不住。有点担 04/25 16:05
7F：→ perdedor: 心你的实验因为这些问题很基本，你们实验室里没有更有经 04/25 16:05
8F：→ perdedor: 验的人可以请教吗? 04/25 16:05
9F：推 perdedor: 如果只是盖子裂开(小裂)而且DMSO是收在culture room的柜 04/25 16:08
10F：→ perdedor: 子里，我会继续用啦。毕竟DMSO蛮毒的。就看你个人多在意 04/25 16:09
谢谢您的完整推 目前实验室确实没有人可以请教了QQ
确实有耳闻DMSO对细胞的高毒性
这部分确实我有打算先做个测试
而後在正式实验时带一个您说的vehicle control
再次谢谢经验分享 感谢！
※ 编辑: steve42125 (120.126.49.54 台湾), 04/25/2020 17:02:07
11F：推 soend: DMSO可以用特殊材质的filter过滤，你可以问一下厂商，如果 04/25 20:29
意思是说 在回溶到1mM时一样用DMSO 而後再用medium稀释成20uM保存供後续实验处理用罗？
12F：→ soend: 你实验是细胞实验，我的作法是稀释在medium去做序列稀释， 04/25 20:29
13F：→ soend: 当然还是要做DMSO的control 04/25 20:29
※ 编辑: steve42125 (223.137.183.135 台湾), 04/25/2020 23:44:17
14F：推 perdedor: 我举个例子好了…假设你用12-well种细胞，所以每一个 04/26 23:26
15F：→ perdedor: well有1 mL的medium。一般细胞药理实验，0.1%的DMSO是可 04/26 23:26
16F：→ perdedor: 接受的，因此你可以直接用pipette加1 uL溶於DMSO的 04/26 23:26
17F：→ perdedor: antagonist到每个well。假设你希望最终作用在细胞的浓 04/26 23:27
18F：→ perdedor: 浓度是20 nM好了，你stock就配antagonist, 20 uM in DMS 04/26 23:28
19F：→ perdedor: DMSO。如果希望DMSO只有0.05%。就配40 uM然後加0.5 uL ( 04/26 23:28
20F：→ perdedor: 你技术ok的话可以加得准)。既然你会有vehicle组别，就 04/26 23:29
21F：→ perdedor: 不必太担心无法控制变因。除非你的antagonist水溶性不 04/26 23:29
22F：→ perdedor: 不错，不然DMSO通常是最好的选择。然後要溶於水的话， 04/26 23:30
23F：→ perdedor: 用水就可以了，不用加medium，反正你还是要做水的 vehic 04/26 23:30
24F：→ perdedor: cle (虽然加不加没差)。 04/26 23:31
P大 真的很感谢你的解释和举例
我现在完全清楚我的Stock和後续Working时要怎麽制备了
真的很谢谢您！
※ 编辑: steve42125 (120.126.49.54 台湾), 04/27/2020 11:07:29
25F：推 taya1991: 其实你可以乾脆用自己的细胞来试试看，比方会加100的 04/28 18:19
26F：→ taya1991: DMSO，那你就分一盘出来加加看会不会影响细胞，顺便看看 04/28 18:20
27F：→ taya1991: 那罐盖子裂开的DMSO会不会因此长菌~ 04/28 18:21
28F：→ taya1991: 当然，能买新的最好，也稳定，免得都没长但突然最後一份 04/28 18:22
29F：→ taya1991: data长了...........要重做就欲哭无泪 04/28 18:22
30F：→ NKTcell: DMSO盖子裂开最好不要再用了 浓度会改变 04/28 22:05
楼上两位的建议确实也很有道理 我在强烈请求老师看看XD
※ 编辑: steve42125 (120.126.49.54 台湾), 04/29/2020 10:44:16