作者qaz3468 (什麼)
看板Biotech
標題IHC染色 脫水封片問題
時間Sun Apr 12 23:28:06 2020
各位好，第一次發文，如果有違反的地方還請麻煩糾正><
最近使用大鼠肺部的石蠟切片4um 染IHC stain
想請問各位最後都是如何脫水封片？
我們實驗室先前的protocol是寫
85%酒精3分>95%酒精3分>100%酒精3分*3>xylene5分*3>封片
但最近發現梯度酒精脫水之後有一個呈色劑會掉色, 顯微鏡下看signal都不見了（vector
的 fast red 有人也用過這個嗎？）
最近用100%3分*3發現好像就沒有掉色，但好像有脫水沒脫乾淨的感覺？
然後四處跟別人討論之後發現其他實驗室的IHC染色完後泡完xylene會先在hood內抽乾，
再封片！
但我們之前都是梯度酒精泡完再泡xylene擦乾玻片背面沒風乾就直接封片了...（學姐還
說不可
以讓玻片乾掉）
想請問一下大家在最後的步驟都是怎麼做的
若是我xylene完直接風乾會讓組織顏色變深嗎？（或是是否會影響hematoxylin的顏色）
另外風乾完會再浸泡xylene再封片嗎？我們實驗室的封片膠含有xylene!
再麻煩各位幫忙解答>< 感激不盡
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 42.77.112.96 (臺灣)
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※ 編輯: qaz3468 (42.77.112.96 臺灣), 04/12/2020 23:29:52
1F：推 firestar35: 拜託大家救救他04/12 23:36
2F：推 TimeWander: 求各路高手幫幫忙04/12 23:37
※ 編輯: qaz3468 (42.77.112.96 臺灣), 04/12/2020 23:41:29
3F：推 shelix: 95%*2-->100%*2-->xylene*2-->不等乾直接封片膠 04/13 21:33
4F：→ johanjohan: hematoxylin跟ph值有關跟xylene應該無關 04/13 21:50
5F：→ johanjohan: 不要脫水後用水性風片膠 04/13 22:00
6F：推 florasflanaa: 掉色的呈色劑一直都是同款同批號嗎？我們每個步驟泡 04/14 01:37
7F：→ florasflanaa: 十分鐘，沒有風乾就封片，最後是xylene啊，很多封 04/14 01:37
8F：→ florasflanaa: 片膠都含xylene沒有風乾的必要，甚至沒有封好還可以 04/14 01:37
9F：→ florasflanaa: 泡xylene重封，但有風乾應該沒關係，我知道的是染 04/14 01:37
10F：→ florasflanaa: 色的過程中不能乾掉，不然抗體會bind不上去，都染 04/14 01:37
11F：→ florasflanaa: 完到封片了跟染色無關，你先仔細查看看你的呈色劑 04/14 01:37
12F：→ florasflanaa: 有沒有問題 04/14 01:37
13F：→ florasflanaa: 或直接問該呈色劑的業務 04/14 01:39
14F：→ enjorus: 我有點看不太懂你的問題。Fast red不是染核的嗎？而原廠 05/14 06:37
15F：→ enjorus: 廠說明書建議不要洗超過十分鐘可以用來代替hematoxylin 05/14 06:38
16F：→ enjorus: 所以你用的究竟是細胞核染劑還是呈色劑？另外你問的脫水 05/14 06:40
17F：→ enjorus: 封片方式兩個都有人用。我個人偏好xylene完就封片。 05/14 06:41