作者qaz3468 (什麽)
看板Biotech
标题IHC染色 脱水封片问题
时间Sun Apr 12 23:28:06 2020
各位好，第一次发文，如果有违反的地方还请麻烦纠正><
最近使用大鼠肺部的石蜡切片4um 染IHC stain
想请问各位最後都是如何脱水封片？
我们实验室先前的protocol是写
85%酒精3分>95%酒精3分>100%酒精3分*3>xylene5分*3>封片
但最近发现梯度酒精脱水之後有一个呈色剂会掉色, 显微镜下看signal都不见了（vector
的 fast red 有人也用过这个吗？）
最近用100%3分*3发现好像就没有掉色，但好像有脱水没脱乾净的感觉？
然後四处跟别人讨论之後发现其他实验室的IHC染色完後泡完xylene会先在hood内抽乾，
再封片！
但我们之前都是梯度酒精泡完再泡xylene擦乾玻片背面没风乾就直接封片了...（学姐还
说不可
以让玻片乾掉）
想请问一下大家在最後的步骤都是怎麽做的
若是我xylene完直接风乾会让组织颜色变深吗？（或是是否会影响hematoxylin的颜色）
另外风乾完会再浸泡xylene再封片吗？我们实验室的封片胶含有xylene!
再麻烦各位帮忙解答>< 感激不尽
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 42.77.112.96 (台湾)
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※ 编辑: qaz3468 (42.77.112.96 台湾), 04/12/2020 23:29:52
1F：推 firestar35: 拜托大家救救他04/12 23:36
2F：推 TimeWander: 求各路高手帮帮忙04/12 23:37
※ 编辑: qaz3468 (42.77.112.96 台湾), 04/12/2020 23:41:29
3F：推 shelix: 95%*2-->100%*2-->xylene*2-->不等乾直接封片胶 04/13 21:33
4F：→ johanjohan: hematoxylin跟ph值有关跟xylene应该无关 04/13 21:50
5F：→ johanjohan: 不要脱水後用水性风片胶 04/13 22:00
6F：推 florasflanaa: 掉色的呈色剂一直都是同款同批号吗？我们每个步骤泡 04/14 01:37
7F：→ florasflanaa: 十分钟，没有风乾就封片，最後是xylene啊，很多封 04/14 01:37
8F：→ florasflanaa: 片胶都含xylene没有风乾的必要，甚至没有封好还可以 04/14 01:37
9F：→ florasflanaa: 泡xylene重封，但有风乾应该没关系，我知道的是染 04/14 01:37
10F：→ florasflanaa: 色的过程中不能乾掉，不然抗体会bind不上去，都染 04/14 01:37
11F：→ florasflanaa: 完到封片了跟染色无关，你先仔细查看看你的呈色剂 04/14 01:37
12F：→ florasflanaa: 有没有问题 04/14 01:37
13F：→ florasflanaa: 或直接问该呈色剂的业务 04/14 01:39
14F：→ enjorus: 我有点看不太懂你的问题。Fast red不是染核的吗？而原厂 05/14 06:37
15F：→ enjorus: 厂说明书建议不要洗超过十分钟可以用来代替hematoxylin 05/14 06:38
16F：→ enjorus: 所以你用的究竟是细胞核染剂还是呈色剂？另外你问的脱水 05/14 06:40
17F：→ enjorus: 封片方式两个都有人用。我个人偏好xylene完就封片。 05/14 06:41