作者ginkgo2017 (virusman)
看板Biotech
標題[求救] SDS-PAGE有一條很緊密的線
時間Mon Feb 24 14:44:12 2020
各位前輩先進好，小弟不才來求教了~
首先附上一張照片
http://i.imgur.com/UFnGuyH.jpg
我的問題是為什麼膠片的最下面會有一條緊縮的條帶呢？
連ladder都會有一樣的情形，所以猜測是膠片本身的問題，但實在不知道問題出在哪...
我的stacking gel是4%，saparation gel是12%。
stacking gel buffer成分是0.5M的tris, 0.4% TEMED, pH 6.8
separación gel buffer成分是1.5M的tris, 0.36% TEMED, pH 8.8
acrylamide是SERVA出的40% Acrylamide-Bis
凝膠時間各30分鐘，用isopropanol壓膠
電泳條件是120~150V跑兩小時（每次電壓都不太一樣，但都是單一電壓跑到底）
大概就是這樣，請大大們提供些意見，感激不盡QQ
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1F：→ shenhsu: 最下面那條...loading dye? 02/24 14:57
2F：→ shenhsu: 所有分不開的小分子也都會在那最底下吧...? 02/24 15:00
3F：推 lemonteas: 看marker好像還沒全部跑開，所以會擠在一起 02/24 17:39
4F：→ lemonteas: 你要的大小有出來的話，那條不用太在意 02/24 17:41
5F：→ KittyGod: 正常 給你看看有無跳海用 02/25 00:32
6F：推 mcy0326: 正常吧，不然怎麼知道跑到哪裡了 02/25 18:27
7F：→ xxtomnyxx: 你的Marker是10-180總共10個條帶的那個嗎？ 02/26 00:38
8F：→ xxtomnyxx: 如果你要看的蛋白是 >25 kDa，那就不影響，不用在意這 02/26 00:40
9F：→ xxtomnyxx: 個問題，除非你要看的蛋白質有<25 kDa的才要煩惱。 02/26 00:40
10F：→ xxtomnyxx: 不過.....我猜你的gel buffer是用acetic acid調pH的？ 02/26 00:41
11F：推 yaliu: 正長阿，沒染就有那條了不是?就看電涌跑到哪而已阿 02/27 19:51
12F：→ yaliu: 送出後才發現錯字好多XD 02/27 19:51
13F：推 abbydu: 正常啊 你第一次跑？ 02/28 15:17
14F：→ machin: 最下面那條線...不是叫leading dye嗎? 03/04 15:19
15F：→ machin: 理由同Ki跟mcy大 03/04 15:19
16F：→ xxtomnyxx: Dye在染色的過程有可能被洗掉，而且marker也有，一般 03/04 17:07
17F：→ xxtomnyxx: marker是不會加loading buffer的，正確的說那條線是 03/04 17:07
18F：→ xxtomnyxx: leading ion的最尾端，所有跑的比trailling ion慢的蛋 03/04 17:14
19F：→ xxtomnyxx: 白質都會被擠在這個交界 03/04 17:15
20F：→ xxtomnyxx: 更正，所有跑的比trailing ion "快"的蛋白質 03/04 17:15
21F：→ xxtomnyxx: 其實SDS-PAGE的原理比一般認知的要複雜的多，大多數人 03/04 17:17
22F：→ xxtomnyxx: 可能都是學「蛋白質因SDS而帶負電所以在電場中往正極 03/04 17:18
23F：→ xxtomnyxx: 跑」。但是根本不是這麼一回事，蛋白質帶負電是必要條 03/04 17:18
24F：→ xxtomnyxx: 件，但不是充分條件 03/04 17:19
25F：→ yaes111: loading dye 03/09 16:17
26F：推 yayayoyi: protein degradation 03/13 00:04
27F：推 best0329: 這很正常，就是loading dye，覺得看了很不爽可以跑久一 03/22 13:10
28F：→ best0329: 點把它跳海跳掉 03/22 13:10