作者ginkgo2017 (virusman)
看板Biotech
标题[求救] SDS-PAGE有一条很紧密的线
时间Mon Feb 24 14:44:12 2020
各位前辈先进好，小弟不才来求教了~
首先附上一张照片
http://i.imgur.com/UFnGuyH.jpg
我的问题是为什麽胶片的最下面会有一条紧缩的条带呢？
连ladder都会有一样的情形，所以猜测是胶片本身的问题，但实在不知道问题出在哪...
我的stacking gel是4%，saparation gel是12%。
stacking gel buffer成分是0.5M的tris, 0.4% TEMED, pH 6.8
separación gel buffer成分是1.5M的tris, 0.36% TEMED, pH 8.8
acrylamide是SERVA出的40% Acrylamide-Bis
凝胶时间各30分钟，用isopropanol压胶
电泳条件是120~150V跑两小时（每次电压都不太一样，但都是单一电压跑到底）
大概就是这样，请大大们提供些意见，感激不尽QQ
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1F：→ shenhsu: 最下面那条...loading dye? 02/24 14:57
2F：→ shenhsu: 所有分不开的小分子也都会在那最底下吧...? 02/24 15:00
3F：推 lemonteas: 看marker好像还没全部跑开，所以会挤在一起 02/24 17:39
4F：→ lemonteas: 你要的大小有出来的话，那条不用太在意 02/24 17:41
5F：→ KittyGod: 正常 给你看看有无跳海用 02/25 00:32
6F：推 mcy0326: 正常吧，不然怎麽知道跑到哪里了 02/25 18:27
7F：→ xxtomnyxx: 你的Marker是10-180总共10个条带的那个吗？ 02/26 00:38
8F：→ xxtomnyxx: 如果你要看的蛋白是 >25 kDa，那就不影响，不用在意这 02/26 00:40
9F：→ xxtomnyxx: 个问题，除非你要看的蛋白质有<25 kDa的才要烦恼。 02/26 00:40
10F：→ xxtomnyxx: 不过.....我猜你的gel buffer是用acetic acid调pH的？ 02/26 00:41
11F：推 yaliu: 正长阿，没染就有那条了不是?就看电涌跑到哪而已阿 02/27 19:51
12F：→ yaliu: 送出後才发现错字好多XD 02/27 19:51
13F：推 abbydu: 正常啊 你第一次跑？ 02/28 15:17
14F：→ machin: 最下面那条线...不是叫leading dye吗? 03/04 15:19
15F：→ machin: 理由同Ki跟mcy大 03/04 15:19
16F：→ xxtomnyxx: Dye在染色的过程有可能被洗掉，而且marker也有，一般 03/04 17:07
17F：→ xxtomnyxx: marker是不会加loading buffer的，正确的说那条线是 03/04 17:07
18F：→ xxtomnyxx: leading ion的最尾端，所有跑的比trailling ion慢的蛋 03/04 17:14
19F：→ xxtomnyxx: 白质都会被挤在这个交界 03/04 17:15
20F：→ xxtomnyxx: 更正，所有跑的比trailing ion "快"的蛋白质 03/04 17:15
21F：→ xxtomnyxx: 其实SDS-PAGE的原理比一般认知的要复杂的多，大多数人 03/04 17:17
22F：→ xxtomnyxx: 可能都是学「蛋白质因SDS而带负电所以在电场中往正极 03/04 17:18
23F：→ xxtomnyxx: 跑」。但是根本不是这麽一回事，蛋白质带负电是必要条 03/04 17:18
24F：→ xxtomnyxx: 件，但不是充分条件 03/04 17:19
25F：→ yaes111: loading dye 03/09 16:17
26F：推 yayayoyi: protein degradation 03/13 00:04
27F：推 best0329: 这很正常，就是loading dye，觉得看了很不爽可以跑久一 03/22 13:10
28F：→ best0329: 点把它跳海跳掉 03/22 13:10