作者knight791211 (三途河的擺渡人)
看板Biotech
標題[求救] qPCR如何測量最小極限值
時間Wed Jan 8 00:35:21 2020
大家好 如標題
想請問如何用real time PCR 測量最小極限值LOD
我知道傳統電泳的方式
就是先定量DNA濃度後連續稀釋
電泳看band有無
不過qPCR我就不懂了
難道不是每次用已知濃度做標準曲線再看Ct就好了嗎?
這方面查了資料還是不太懂 所以上來請教
感謝各位幫忙
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1F：推 aquaunder: 用分子量計算標準品copy number後 序列稀釋qPCR 01/09 00:12
2F：→ aquaunder: 看Ct值退後情況 以及Ct躺平的最低稀釋度即可推測LOD 01/09 00:14
3F：→ hitmd: 我用 lod qpcr 下去辜狗蠻多資訊的，可以看看 01/15 16:57
4F：→ nike77114: 序列稀釋後得到一檢量線，針對該檢量線的Standard 02/07 13:30
5F：→ nike77114: error算出數值，而後以斜率除以該se(Y)得到的數字乘上 02/07 13:38
6F：→ nike77114: 3.3得到機器的LOD乘上10得到LOQ 02/07 13:49
7F：→ nike77114: 而後把機器的LOQ作為樣品的添加濃度重複7次or以上 02/07 13:50
8F：→ nike77114: 計算標準差(S)，而後帶入LOD = t0.99 * S。t0.99 02/07 13:51
9F：→ nike77114: 用excel =T.INV(0.99,df)計算就可以得到真實的LOD 02/07 13:52
10F：→ nike77114: 乘上10就是LOQ了 02/07 13:52