※ 引述《pets910011 (Littlebo)》之銘言： : 各位大大好，敝人最近開始養3T3-L1細胞，但在加入分化劑後群聚的細胞有些部分會往旁 : 邊散開變成一個洞(一加入分化劑後就去顯微鏡下觀察到的現象)，想問是否是因為細胞的 : 數量over-confluent的原因?https://imgur.com/5sJ90o9及https://imgur.com/ycQ4tb0 : 培養條件： : 細胞數8萬/3.5cm2的well，繼代後隔天等貼盤後加入分化劑。 : 分化劑IBMX_O.5mM、DEXA_1uM、INS_1ug/mL : medium：DMEM/FBS+1%NEAA+L-Glutamine+Pen-Strep。 : 另外有幾個問題想詢問各位前輩： : 1.請問preadipocyte expansion medium中的BCS血清，可否改用馬血清? : 2.加入分化劑的那天是為第0天，而在第2天的時候我發現我的細胞還是有持續分裂的狀態 : ，這樣是否代表這盤的細胞已經老化，不會再進行分化了?(代數P+21) : 3.想請問如附圖的細胞滿度(https://imgur.com/WVe1kvf)是否適合加分化劑了呢? : 謝謝各位前輩跟救命恩人阿~~~~ : 各位前輩如果還有想提醒的小細節再麻煩您們不吝嗇地提出，謝謝! ———————————————————— 3t3l1的確會有接觸性抑制的問題，但你的細胞還沒到會產生的狀況，會破洞的原因是因為你的分化藥劑有些是用酒精、DMSO、或是hcl buffer配置的，當你直接在well上方加入後會因為密度的關係直接沉降到中央處，造成局部濃度過高而細胞死亡破洞，我都是在約八分滿時候，用塑膠離心管先配置分化藥劑，內含BCS與HG_DMEM及應有的分化藥劑，之後換液時就直接下分化medium下去避免上述問題，之後分化完成要做實驗時也可以先將你的樣品預先加入medium在進行給藥 此外血清對於3t3l1分化成功與否是非常重要的，有些嚴謹的實驗室甚至都用同一批的血清避免影響分化的變因 3t3l1的代數建議落在15代以內，基本上此細胞株的代數會影響到分化率 希望能幫助到你 ----- Sent from JPTT on my iPhone --

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