※ 引述《pets910011 (Littlebo)》之铭言： : 各位大大好，敝人最近开始养3T3-L1细胞，但在加入分化剂後群聚的细胞有些部分会往旁 : 边散开变成一个洞(一加入分化剂後就去显微镜下观察到的现象)，想问是否是因为细胞的 : 数量over-confluent的原因?https://imgur.com/5sJ90o9及https://imgur.com/ycQ4tb0 : 培养条件： : 细胞数8万/3.5cm2的well，继代後隔天等贴盘後加入分化剂。 : 分化剂IBMX_O.5mM、DEXA_1uM、INS_1ug/mL : medium：DMEM/FBS+1%NEAA+L-Glutamine+Pen-Strep。 : 另外有几个问题想询问各位前辈： : 1.请问preadipocyte expansion medium中的BCS血清，可否改用马血清? : 2.加入分化剂的那天是为第0天，而在第2天的时候我发现我的细胞还是有持续分裂的状态 : ，这样是否代表这盘的细胞已经老化，不会再进行分化了?(代数P+21) : 3.想请问如附图的细胞满度(https://imgur.com/WVe1kvf)是否适合加分化剂了呢? : 谢谢各位前辈跟救命恩人阿~~~~ : 各位前辈如果还有想提醒的小细节再麻烦您们不吝啬地提出，谢谢! ———————————————————— 3t3l1的确会有接触性抑制的问题，但你的细胞还没到会产生的状况，会破洞的原因是因为你的分化药剂有些是用酒精、DMSO、或是hcl buffer配置的，当你直接在well上方加入後会因为密度的关系直接沉降到中央处，造成局部浓度过高而细胞死亡破洞，我都是在约八分满时候，用塑胶离心管先配置分化药剂，内含BCS与HG_DMEM及应有的分化药剂，之後换液时就直接下分化medium下去避免上述问题，之後分化完成要做实验时也可以先将你的样品预先加入medium在进行给药 此外血清对於3t3l1分化成功与否是非常重要的，有些严谨的实验室甚至都用同一批的血清避免影响分化的变因 3t3l1的代数建议落在15代以内，基本上此细胞株的代数会影响到分化率 希望能帮助到你 ----- Sent from JPTT on my iPhone --

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