請教各位有在做小鼠動物實驗的專家們 因為實驗室內只有我在做腦組織實驗 目前在測試不讓腦破洞方法(上一批檢體因為破洞結果都不能用..) 在試過了文獻以及詢問他人的方法測試後仍然看到片子有破洞 因此想請有經驗的各位提供是否有可以改善的建議 目前做法有試過4種 以下腦照片都是正常腦 (照片主要都是染H&E ） 第一種 （看到滿多文獻都這樣做） 灌流後（先PBS再用4% PFA) 取腦 4% PFA RT O/N 15% surcose in PBS until sink 30% surcose until sink 用擦手紙把水分瀝乾 OCT包埋（底下先做一層底-20預冷） 腦放入後放-80(放至少兩天） 切之前1 h 丟切片機才切 染色前先用10%中性福馬林固定 RT 15分 https://i.imgur.com/4lCeas1.jpg https://i.imgur.com/AOuNS3Z.jpg 第二種 （灌流後不做任何處理直接包） 灌流後（先PBS再用4% PFA) 取腦 用擦手紙把水分瀝乾 OCT包埋（底下先做一層底-20預冷） 腦放入後放-80（放至少兩天） 切之前1 h 丟切片機才切 染色前先用10%中性福馬林固定 RT 15分 https://i.imgur.com/uQuPN3P.jpg 第三種 （脫水溶液換成用水配） 灌流後（先PBS再用4% PFA)取腦 4% PFA RT O/N 10% surcose in ddH2O 1 h 30% surcose until sink 用擦手紙把水分瀝乾 OCT包埋（底下先做一層底-20預冷） 腦放入後放-80 切之前1 h 丟切片機才切 染色前先用10%中性福馬林固定 RT 15分 https://i.imgur.com/bH848r1.jpg https://i.imgur.com/0g6sBlZ.jpg 第四種 （試著把前面fix時間拉長） 灌流後（先PBS再用4% PFA)取腦 10% 中性福馬林 RT 2 d 10% surcose in ddH2O 1 h 30% surcose until sink 用擦手紙把水分瀝乾 OCT包埋（底下先做一層底-20預冷） 腦放入後放-80 切之前1 h 丟切片機才切 染色前先用10% methanol固定 RT 10分 https://i.imgur.com/0BfglLT.jpg 目前看起來是用文獻的方法還是會遇到破洞情況，且通常破的位置主要都在腦的外圍區塊 （cortex部分，腦內也會有看到） 目前有考慮 1.用液態氮凍？（看到有些文獻說這樣不會破？） 2.加長脫水時間？（梯度脫水or30% surcose放兩次） 想請問各位是否有建議其他包埋的方法以確保不會有破洞? 非常感謝各位給的建議 --

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