作者mark24365273 (小玮)
看板Biotech
标题[求救] 小鼠脑切片破洞
时间Fri Dec 20 23:05:01 2019
请教各位有在做小鼠动物实验的专家们
因为实验室内只有我在做脑组织实验
目前在测试不让脑破洞方法(上一批检体因为破洞结果都不能用..)
在试过了文献以及询问他人的方法测试後仍然看到片子有破洞
因此想请有经验的各位提供是否有可以改善的建议
目前做法有试过4种 以下脑照片都是正常脑
(照片主要都是染H&E )
第一种 (看到满多文献都这样做)
灌流後(先PBS再用4% PFA) 取脑
4% PFA RT O/N
15% surcose in PBS until sink
30% surcose until sink
用擦手纸把水分沥乾
OCT包埋(底下先做一层底-20预冷)
脑放入後放-80(放至少两天)
切之前1 h 丢切片机才切
染色前先用10%中性福马林固定 RT 15分
https://i.imgur.com/4lCeas1.jpg
https://i.imgur.com/AOuNS3Z.jpg
第二种 (灌流後不做任何处理直接包)
灌流後(先PBS再用4% PFA) 取脑
用擦手纸把水分沥乾
OCT包埋(底下先做一层底-20预冷)
脑放入後放-80(放至少两天)
切之前1 h 丢切片机才切
染色前先用10%中性福马林固定 RT 15分
https://i.imgur.com/uQuPN3P.jpg
第三种 (脱水溶液换成用水配)
灌流後(先PBS再用4% PFA)取脑
4% PFA RT O/N
10% surcose in ddH2O 1 h
30% surcose until sink
用擦手纸把水分沥乾
OCT包埋(底下先做一层底-20预冷)
脑放入後放-80
切之前1 h 丢切片机才切
染色前先用10%中性福马林固定 RT 15分
https://i.imgur.com/bH848r1.jpg
https://i.imgur.com/0g6sBlZ.jpg
第四种 (试着把前面fix时间拉长)
灌流後(先PBS再用4% PFA)取脑
10% 中性福马林 RT 2 d
10% surcose in ddH2O 1 h
30% surcose until sink
用擦手纸把水分沥乾
OCT包埋(底下先做一层底-20预冷)
脑放入後放-80
切之前1 h 丢切片机才切
染色前先用10% methanol固定 RT 10分
https://i.imgur.com/0BfglLT.jpg
目前看起来是用文献的方法还是会遇到破洞情况,且通常破的位置主要都在脑的外围区块
(cortex部分,脑内也会有看到)
目前有考虑
1.用液态氮冻?(看到有些文献说这样不会破?)
2.加长脱水时间?(梯度脱水or30% surcose放两次)
想请问各位是否有建议其他包埋的方法以确保不会有破洞?
非常感谢各位给的建议
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1F:推 yaes111: 外围破洞的话应该是取的时候有划到吧 12/22 08:47
2F:→ mark24365273: 谢谢y大建议 重新包埋後发现应该是包的时候没有包好 01/30 17:59
3F:→ mark24365273: 重试後就没有问题 01/30 17:59