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请教各位有在做小鼠动物实验的专家们 因为实验室内只有我在做脑组织实验 目前在测试不让脑破洞方法(上一批检体因为破洞结果都不能用..) 在试过了文献以及询问他人的方法测试後仍然看到片子有破洞 因此想请有经验的各位提供是否有可以改善的建议 目前做法有试过4种 以下脑照片都是正常脑 (照片主要都是染H&E ) 第一种 (看到满多文献都这样做) 灌流後(先PBS再用4% PFA) 取脑 4% PFA RT O/N 15% surcose in PBS until sink 30% surcose until sink 用擦手纸把水分沥乾 OCT包埋(底下先做一层底-20预冷) 脑放入後放-80(放至少两天) 切之前1 h 丢切片机才切 染色前先用10%中性福马林固定 RT 15分 https://i.imgur.com/4lCeas1.jpg
https://i.imgur.com/AOuNS3Z.jpg
第二种 (灌流後不做任何处理直接包) 灌流後(先PBS再用4% PFA) 取脑 用擦手纸把水分沥乾 OCT包埋(底下先做一层底-20预冷) 脑放入後放-80(放至少两天) 切之前1 h 丢切片机才切 染色前先用10%中性福马林固定 RT 15分 https://i.imgur.com/uQuPN3P.jpg
第三种 (脱水溶液换成用水配) 灌流後(先PBS再用4% PFA)取脑 4% PFA RT O/N 10% surcose in ddH2O 1 h 30% surcose until sink 用擦手纸把水分沥乾 OCT包埋(底下先做一层底-20预冷) 脑放入後放-80 切之前1 h 丢切片机才切 染色前先用10%中性福马林固定 RT 15分 https://i.imgur.com/bH848r1.jpg
https://i.imgur.com/0g6sBlZ.jpg
第四种 (试着把前面fix时间拉长) 灌流後(先PBS再用4% PFA)取脑 10% 中性福马林 RT 2 d 10% surcose in ddH2O 1 h 30% surcose until sink 用擦手纸把水分沥乾 OCT包埋(底下先做一层底-20预冷) 脑放入後放-80 切之前1 h 丢切片机才切 染色前先用10% methanol固定 RT 10分 https://i.imgur.com/0BfglLT.jpg
目前看起来是用文献的方法还是会遇到破洞情况,且通常破的位置主要都在脑的外围区块 (cortex部分,脑内也会有看到) 目前有考虑 1.用液态氮冻?(看到有些文献说这样不会破?) 2.加长脱水时间?(梯度脱水or30% surcose放两次) 想请问各位是否有建议其他包埋的方法以确保不会有破洞? 非常感谢各位给的建议 --



※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 1.160.208.226 (台湾)
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1576854303.A.5A3.html
1F:推 yaes111: 外围破洞的话应该是取的时候有划到吧 12/22 08:47
2F:→ mark24365273: 谢谢y大建议 重新包埋後发现应该是包的时候没有包好 01/30 17:59
3F:→ mark24365273: 重试後就没有问题 01/30 17:59







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