作者bahrimank (aten)
看板Biotech
標題[求救] clonogenic assay seeding
時間Mon Dec 9 16:07:12 2019
各位前輩好，不才最近剛開始操作clonogenic assay
遇到關於種植極少數細胞的困擾
想請問各位有經驗的前輩的經驗，或是我可以如何改進
先謝謝各位前輩了
目前實驗步驟:
將細胞打下後，離心重新回溶1ml medium (此稱原管)
取100ul 原管細胞液+900ul medium配成管1，以管1來計算細胞
管1通常細胞算出來會在3*10^5 cells/ml
再將管1做10X稀釋成3*10^4 cells/ml (100ul 管1細胞液+900ul medium，此稱管2)
我是將細胞種在6 well, 每well種100顆或200顆細胞，以種植100顆cell為例
我會在新eppendorf裡，取33ul 管2細胞液(1000顆cell) +967ul medium
配成100 cells/100ul (此稱管3)，將管3取100ul 細胞液進6 well內，
最後再補2ml medium，集結束種植
有確認每次取細胞及稀釋前都有充分pipetting
但是seeding的細胞數都不到原訂的1成(需要種100顆cell只有長出不到10個colony)
(細胞沒有經過藥物或是任何刺激處理)
想請問各位前輩能不能提供給不才一些建議和經驗分享呢?
非常感謝各位前輩撥冗觀看的我問題，謝謝大家
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1F：→ xxtomnyxx: 種多長少很正常，雖然有細胞種類之間的差異，但是單顆 12/09 16:43
2F：→ xxtomnyxx: 細胞周圍沒同伴本來就孤單寂寞覺得冷很容易死。 12/09 16:43
3F：→ xxtomnyxx: 看你實驗的目的是什麼吧？你可以試試提高細胞量，測幾 12/09 16:44
4F：→ xxtomnyxx: 個濃度範圍後選長出來的colony數量密度符合你需要的條 12/09 16:45
5F：→ xxtomnyxx: 件來做 12/09 16:45
6F：→ xxtomnyxx: 或是可以試試看用conditioned medium養，細胞密度太低 12/09 16:46
7F：→ xxtomnyxx: 可能讓medium中缺少某種細胞分泌的生長因子，用 12/09 16:47
8F：→ xxtomnyxx: condictioned medium或許可以解決 12/09 16:47
9F：→ turtle24: 細胞有時喜歡貼在牆邊，用顯微鏡找找 12/09 17:49
10F：推 Ice9: 加 1/4 細胞打下前的 medium 養看看，讓它有附近有同伴的錯 12/10 14:03
11F：→ Ice9: 覺。 12/10 14:03
12F：→ bahrimank: 好的，謝謝各位前輩的建議，我會試試看的^^ 12/11 01:55