作者bahrimank (aten)
看板Biotech
标题[求救] clonogenic assay seeding
时间Mon Dec 9 16:07:12 2019
各位前辈好，不才最近刚开始操作clonogenic assay
遇到关於种植极少数细胞的困扰
想请问各位有经验的前辈的经验，或是我可以如何改进
先谢谢各位前辈了
目前实验步骤:
将细胞打下後，离心重新回溶1ml medium (此称原管)
取100ul 原管细胞液+900ul medium配成管1，以管1来计算细胞
管1通常细胞算出来会在3*10^5 cells/ml
再将管1做10X稀释成3*10^4 cells/ml (100ul 管1细胞液+900ul medium，此称管2)
我是将细胞种在6 well, 每well种100颗或200颗细胞，以种植100颗cell为例
我会在新eppendorf里，取33ul 管2细胞液(1000颗cell) +967ul medium
配成100 cells/100ul (此称管3)，将管3取100ul 细胞液进6 well内，
最後再补2ml medium，集结束种植
有确认每次取细胞及稀释前都有充分pipetting
但是seeding的细胞数都不到原订的1成(需要种100颗cell只有长出不到10个colony)
(细胞没有经过药物或是任何刺激处理)
想请问各位前辈能不能提供给不才一些建议和经验分享呢?
非常感谢各位前辈拨冗观看的我问题，谢谢大家
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1F：→ xxtomnyxx: 种多长少很正常，虽然有细胞种类之间的差异，但是单颗 12/09 16:43
2F：→ xxtomnyxx: 细胞周围没同伴本来就孤单寂寞觉得冷很容易死。 12/09 16:43
3F：→ xxtomnyxx: 看你实验的目的是什麽吧？你可以试试提高细胞量，测几 12/09 16:44
4F：→ xxtomnyxx: 个浓度范围後选长出来的colony数量密度符合你需要的条 12/09 16:45
5F：→ xxtomnyxx: 件来做 12/09 16:45
6F：→ xxtomnyxx: 或是可以试试看用conditioned medium养，细胞密度太低 12/09 16:46
7F：→ xxtomnyxx: 可能让medium中缺少某种细胞分泌的生长因子，用 12/09 16:47
8F：→ xxtomnyxx: condictioned medium或许可以解决 12/09 16:47
9F：→ turtle24: 细胞有时喜欢贴在墙边，用显微镜找找 12/09 17:49
10F：推 Ice9: 加 1/4 细胞打下前的 medium 养看看，让它有附近有同伴的错 12/10 14:03
11F：→ Ice9: 觉。 12/10 14:03
12F：→ bahrimank: 好的，谢谢各位前辈的建议，我会试试看的^^ 12/11 01:55