作者honey823 (...)
看板Biotech
標題[求救] 脂肪肝之細胞模式建立
時間Mon Dec 2 09:39:05 2019
我們實驗室想建立脂肪肝的細胞模式，目前使用HepG2細胞,
餵食OA-BSA的medium, 造成脂肪堆積，來當成脂肪肝的細胞模式
(參考有的paper是這麼做的)
但是目前碰到一些問題
(1) 我們用的OA-BSA是直接買sigma的oleic acid(100mM OA in 100% ETOH)
與FFA-free BSA (2M in PBS)回來配製的, 以6 mM OA/1M BSA (6:1)的濃度
加入細胞培養24~48小時之後, 用Oil-Red-O staining來觀察lipid droplet
目測的染色有差異, 用isopropanol溶解後, 去測OD 510的吸光值
但是與control組比較起來, 並沒有明顯的差異
(2) 有查到文獻說, 這樣的處理會引起oxidative stress, 我們也用DCHDA染色
再上flow來觀察, 但是也沒有明顯的差異
想請教版上是否有做類似實驗的經驗,
是否有推薦induce 脂肪堆積的OA-BSA或者PA-OA的配方呢?
(當初有嘗試以PA來做，但是PA的溶解度是個很大的問題跟挑戰)
以及我們的實驗方法是否有誤, 有需要改進的地方呢, 謝謝
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1F：推 tynse71864: 我當初做 Huh7 是用1% FFA-BSA跟 100mM OA , 用 BODIP 12/02 12:25
2F：→ tynse71864: Y 染也有差異; 但我的 OA 是溶在20%MeOH 12/02 12:25
3F：→ tynse71864: OD 510是不是會測到其他東西啊？ 我之前是用顯微鏡一 12/02 12:28
4F：→ tynse71864: 群一群拍， 然後定 LD 的量 12/02 12:28
5F：→ tynse71864: (註： 我的目的是看 VLDL secretion) 12/02 12:29
6F：推 yuasa: 第一點:final濃度是多少?細胞種了多少用多少isopropanol溶? 12/02 20:52
7F：→ yuasa: 做了幾個重複? 12/02 20:52
8F：→ yuasa: 第二點:OA相對於PA毒性小很多，所以要測到oxidative stress 12/02 20:53
9F：→ yuasa: 或cell death的劑量要用更高。原因之一是OA更容易形成TG儲 12/02 20:55
10F：→ yuasa: 存在lipid droplets。PA沒有形成那麼多油滴但細胞死得快 12/02 20:56
11F：→ yuasa: 要溶PA在BSA溶液裡需要加熱、加NAOH及讓它們充分時間結合 12/02 20:58
12F：→ yuasa: 你可以找protocol或者是我可以很不要臉地推薦自己的論文XD 12/02 20:59
13F：→ honey823: 感謝樓上兩位的經驗分享。其實本來是想說有沒有做相關 12/03 08:23
14F：→ honey823: 脂肪肝細胞模式的實驗室，有protocol可以借我們參考的 12/03 08:23
15F：→ honey823: yuasa大可以提供您的大作給我們參考一下嗎，謝謝 12/03 08:24
16F：推 Ianthegood: 借問一下 lipid secretion的機制找到了嗎? 12/03 20:34
17F：推 yaes111: oil red o 染完較容易殘留 建議你選用其他方式染色定量 12/04 18:21
18F：→ yaes111: 除非差異真的很大 OA要有大量堆積 可能要你的2-3倍劑量 12/04 18:21
19F：推 yaes111: 看錯 以為你是用100uM 12/04 18:36
20F：推 st110261: 環境氧氣濃度沒有控制嗎？ 12/04 19:50
21F：推 tynse71864: I 大是說 hepatocyte嗎 12/04 21:29
22F：推 Ianthegood: 是的 跟肝不熟 12/04 23:59
23F：→ yuasa: 站內信我。不然我怎麼給你我的論文 12/05 19:08
24F：推 money1015: 用oa/pa的複合配方效果不是會比較好嗎？ 03/13 10:12