作者honey823 (...)
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标题[求救] 脂肪肝之细胞模式建立
时间Mon Dec 2 09:39:05 2019
我们实验室想建立脂肪肝的细胞模式，目前使用HepG2细胞,
喂食OA-BSA的medium, 造成脂肪堆积，来当成脂肪肝的细胞模式
(参考有的paper是这麽做的)
但是目前碰到一些问题
(1) 我们用的OA-BSA是直接买sigma的oleic acid(100mM OA in 100% ETOH)
与FFA-free BSA (2M in PBS)回来配制的, 以6 mM OA/1M BSA (6:1)的浓度
加入细胞培养24~48小时之後, 用Oil-Red-O staining来观察lipid droplet
目测的染色有差异, 用isopropanol溶解後, 去测OD 510的吸光值
但是与control组比较起来, 并没有明显的差异
(2) 有查到文献说, 这样的处理会引起oxidative stress, 我们也用DCHDA染色
再上flow来观察, 但是也没有明显的差异
想请教版上是否有做类似实验的经验,
是否有推荐induce 脂肪堆积的OA-BSA或者PA-OA的配方呢?
(当初有尝试以PA来做，但是PA的溶解度是个很大的问题跟挑战)
以及我们的实验方法是否有误, 有需要改进的地方呢, 谢谢
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1F：推 tynse71864: 我当初做 Huh7 是用1% FFA-BSA跟 100mM OA , 用 BODIP 12/02 12:25
2F：→ tynse71864: Y 染也有差异; 但我的 OA 是溶在20%MeOH 12/02 12:25
3F：→ tynse71864: OD 510是不是会测到其他东西啊？ 我之前是用显微镜一 12/02 12:28
4F：→ tynse71864: 群一群拍， 然後定 LD 的量 12/02 12:28
5F：→ tynse71864: (注： 我的目的是看 VLDL secretion) 12/02 12:29
6F：推 yuasa: 第一点:final浓度是多少?细胞种了多少用多少isopropanol溶? 12/02 20:52
7F：→ yuasa: 做了几个重复? 12/02 20:52
8F：→ yuasa: 第二点:OA相对於PA毒性小很多，所以要测到oxidative stress 12/02 20:53
9F：→ yuasa: 或cell death的剂量要用更高。原因之一是OA更容易形成TG储 12/02 20:55
10F：→ yuasa: 存在lipid droplets。PA没有形成那麽多油滴但细胞死得快 12/02 20:56
11F：→ yuasa: 要溶PA在BSA溶液里需要加热、加NAOH及让它们充分时间结合 12/02 20:58
12F：→ yuasa: 你可以找protocol或者是我可以很不要脸地推荐自己的论文XD 12/02 20:59
13F：→ honey823: 感谢楼上两位的经验分享。其实本来是想说有没有做相关 12/03 08:23
14F：→ honey823: 脂肪肝细胞模式的实验室，有protocol可以借我们参考的 12/03 08:23
15F：→ honey823: yuasa大可以提供您的大作给我们参考一下吗，谢谢 12/03 08:24
16F：推 Ianthegood: 借问一下 lipid secretion的机制找到了吗? 12/03 20:34
17F：推 yaes111: oil red o 染完较容易残留 建议你选用其他方式染色定量 12/04 18:21
18F：→ yaes111: 除非差异真的很大 OA要有大量堆积 可能要你的2-3倍剂量 12/04 18:21
19F：推 yaes111: 看错 以为你是用100uM 12/04 18:36
20F：推 st110261: 环境氧气浓度没有控制吗？ 12/04 19:50
21F：推 tynse71864: I 大是说 hepatocyte吗 12/04 21:29
22F：推 Ianthegood: 是的 跟肝不熟 12/04 23:59
23F：→ yuasa: 站内信我。不然我怎麽给你我的论文 12/05 19:08
24F：推 money1015: 用oa/pa的复合配方效果不是会比较好吗？ 03/13 10:12