作者ETBR (SDS)
看板Biotech
標題[討論] 接好的質體多了未知片段
時間Sat Nov 9 19:05:57 2019
各位版友好
之前做cloning時將約1500bp的片段以Nde1及Xho1接到pET30a上，
之後transform到BL21(DE3)做蛋白表現，
蛋白有確實被表現，從BL21抽的質體用Nde1及Xho1酵切後也確實只有vector及insert的片段，
當時就用BL21做stock保存，
過了一年，當我再次從BL21上抽質體用Nde1及Xho1酵切後，卻多了一條1000bp及750bp的片段，但是蛋白卻還是能正常表現，實驗都有分次做三重複。
不曉得各位有沒有類似的經驗?
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1F：推 ampicillin: 送定序看有沒污染囉 11/09 20:32
2F：→ turtle24: 我習慣不使用接進去的切位做check 11/09 23:44
3F：推 Ice9: 分別用 insert & vector 上的切位切切看。或是直接 PCR 再 11/10 17:35
4F：→ Ice9: 測。 11/10 17:35
5F：→ Ice9: 多出來的東西從是讓人不放心。即便實驗結果可能符合預期。 11/10 17:36
6F：推 Ianthegood: 你確定之前做的都是對的嗎...? 我會把整個plasmid都定 11/12 07:32
7F：→ Ianthegood: 完一圈 11/12 07:32
8F：推 andy6001: 同樓上建議把整個質體送定序 11/15 09:18