作者ETBR (SDS)
看板Biotech
标题[讨论] 接好的质体多了未知片段
时间Sat Nov 9 19:05:57 2019
各位版友好
之前做cloning时将约1500bp的片段以Nde1及Xho1接到pET30a上，
之後transform到BL21(DE3)做蛋白表现，
蛋白有确实被表现，从BL21抽的质体用Nde1及Xho1酵切後也确实只有vector及insert的片段，
当时就用BL21做stock保存，
过了一年，当我再次从BL21上抽质体用Nde1及Xho1酵切後，却多了一条1000bp及750bp的片段，但是蛋白却还是能正常表现，实验都有分次做三重复。
不晓得各位有没有类似的经验?
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1F：推 ampicillin: 送定序看有没污染罗 11/09 20:32
2F：→ turtle24: 我习惯不使用接进去的切位做check 11/09 23:44
3F：推 Ice9: 分别用 insert & vector 上的切位切切看。或是直接 PCR 再 11/10 17:35
4F：→ Ice9: 测。 11/10 17:35
5F：→ Ice9: 多出来的东西从是让人不放心。即便实验结果可能符合预期。 11/10 17:36
6F：推 Ianthegood: 你确定之前做的都是对的吗...? 我会把整个plasmid都定 11/12 07:32
7F：→ Ianthegood: 完一圈 11/12 07:32
8F：推 andy6001: 同楼上建议把整个质体送定序 11/15 09:18