作者hachibuya (黃金騎士 牙狼)
看板Biotech
標題[方法] CRISPR/Cas9 KO細胞與HDR plasmid?
時間Wed Sep 18 17:40:56 2019
剛剛投的文章收到revise
實驗室一直以來都是用siRNA 和 shRNA做 knockdown 細胞
沒想到reviewer之一覺得siRNA已經過時了 要求用Crispr/cas9做knockout
上網查發現santa cruz有賣做好的CRISPR/Cas9 KO plasmid
買了plasmid後接下來看起來好像不是很難
transfection進到細胞後再用FACS把發光的細胞篩出來即可
但是看了santa cruz的protocol建議也要同時transfection HDR Plasmid
HDR Plasmid也很貴 等於要買兩個 plasmid
想請問有經驗的人沒有HDR Plasmid 是DSB的修復會出問題 影響的是效率而已
還是說一定要有HDR Plasmid? 謝謝
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 133.87.71.225 (日本)
※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1568799658.A.AFF.html
1F：→ a90648: 根據官網上的說法是幫你塞進去RFP 和Puro讓你可以篩選 09/18 18:02
2F：→ blence: 時間不夠的話,其實不用花這個心思去做 09/18 19:14
3F：→ blence: 而且你是用siRNA而不是shRNA或Cre KO,想要用CRISPR來驗證 09/18 19:17
4F：→ blence: 的話,也應該是用dCas9的CRISPRi,而不是Cas9的KO 09/18 19:19
5F：推 qiet: 應該先想想怎麼說服他你們的實驗就足夠證明假說吧 09/18 19:56
6F：推 jabari: 同意樓上...新潮的東西就是錢...哪有那麼有錢來Q皿Q 09/19 17:27
7F：推 yujutw: 沒有HDR的話 就是靠NHEJ的隨機mutation把該基因knockout 09/23 19:08
8F：推 datro: 推薦你找RNAiCore服務 09/29 22:41