作者hachibuya (黄金骑士 牙狼)
看板Biotech
标题[方法] CRISPR/Cas9 KO细胞与HDR plasmid?
时间Wed Sep 18 17:40:56 2019
刚刚投的文章收到revise
实验室一直以来都是用siRNA 和 shRNA做 knockdown 细胞
没想到reviewer之一觉得siRNA已经过时了 要求用Crispr/cas9做knockout
上网查发现santa cruz有卖做好的CRISPR/Cas9 KO plasmid
买了plasmid後接下来看起来好像不是很难
transfection进到细胞後再用FACS把发光的细胞筛出来即可
但是看了santa cruz的protocol建议也要同时transfection HDR Plasmid
HDR Plasmid也很贵 等於要买两个 plasmid
想请问有经验的人没有HDR Plasmid 是DSB的修复会出问题 影响的是效率而已
还是说一定要有HDR Plasmid? 谢谢
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1F：→ a90648: 根据官网上的说法是帮你塞进去RFP 和Puro让你可以筛选 09/18 18:02
2F：→ blence: 时间不够的话,其实不用花这个心思去做 09/18 19:14
3F：→ blence: 而且你是用siRNA而不是shRNA或Cre KO,想要用CRISPR来验证 09/18 19:17
4F：→ blence: 的话,也应该是用dCas9的CRISPRi,而不是Cas9的KO 09/18 19:19
5F：推 qiet: 应该先想想怎麽说服他你们的实验就足够证明假说吧 09/18 19:56
6F：推 jabari: 同意楼上...新潮的东西就是钱...哪有那麽有钱来Q皿Q 09/19 17:27
7F：推 yujutw: 没有HDR的话 就是靠NHEJ的随机mutation把该基因knockout 09/23 19:08
8F：推 datro: 推荐你找RNAiCore服务 09/29 22:41