作者sianpa00 (ccc)
看板Biotech
標題[求救] primer濃度誤差
時間Fri Aug 16 13:28:03 2019
最近訂了一批primer，以往都造著datasheet給的回溶體積來回溶，但最近學長說把
回溶完的primer拿去nanodrop測會發現廠商給的回溶體積是不準的，我實際測完也發現差
了將近兩倍，想請問一下大家，primer濃度會影響到qPCR的準確性嗎？
我個人是以為只差在太多專一性不好,太少可能跑不出來而已？，但學長說準確性會
有差，這樣是否以前做的data都有疑慮QQ,想請問大家的意見！
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1F：→ blence: 專一性跟準確性差在哪裡？08/16 16:03
阿！ 忘記說他的建議回溶體積都比較多，所以濃度應該比較低，所以應該只會有跑不出
來的問題？
※ 編輯: sianpa00 (140.112.54.111 臺灣), 08/16/2019 16:29:01
2F：推 Ianthegood: 首先你如果primer是訂desalting 那裡面本來就會有不08/16 18:25
3F：→ Ianthegood: 純的小片段 再來第一代的nanodrop其實不準到靠北 第三08/16 18:25
4F：→ Ianthegood: 不管怎樣你的primer都得拉過standard curve才能拿來定08/16 18:25
5F：→ Ianthegood: 量啊08/16 18:25
所以直接用nanodrop來定量是不對的？
我應該相信data sheet上的定量對嗎？
※ 編輯: sianpa00 (27.242.130.58 臺灣), 08/16/2019 21:22:03
6F：推 Ianthegood: 不要管定量 總之用同一組同樣量的primer拉standard cu 08/16 22:42
7F：→ Ianthegood: rve跟sample 08/16 22:42
8F：推 qiet: 差兩倍也差太多? 是選ssDNA定量嗎? 08/18 20:30
9F：推 dubius: 不管廠商合成的濃度或你用nanodrop測定的都是不準的 08/19 18:30
10F：推 dubius: 但您問的是引子濃度是否會影響qpcr 答案是會 但不一定 08/19 18:36
11F：推 dubius: 您可以作一個前後因子分別2倍序列稀釋的測試矩陣 08/19 18:38
12F：→ dubius: 就可以解答你的問題 08/19 18:39
13F：推 darkbishop: 真的想知道的話 可以用Qubit 非常準 08/22 11:58