作者sianpa00 (ccc)
看板Biotech
标题[求救] primer浓度误差
时间Fri Aug 16 13:28:03 2019
最近订了一批primer，以往都造着datasheet给的回溶体积来回溶，但最近学长说把
回溶完的primer拿去nanodrop测会发现厂商给的回溶体积是不准的，我实际测完也发现差
了将近两倍，想请问一下大家，primer浓度会影响到qPCR的准确性吗？
我个人是以为只差在太多专一性不好,太少可能跑不出来而已？，但学长说准确性会
有差，这样是否以前做的data都有疑虑QQ,想请问大家的意见！
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1F：→ blence: 专一性跟准确性差在哪里？08/16 16:03
阿！ 忘记说他的建议回溶体积都比较多，所以浓度应该比较低，所以应该只会有跑不出
来的问题？
※ 编辑: sianpa00 (140.112.54.111 台湾), 08/16/2019 16:29:01
2F：推 Ianthegood: 首先你如果primer是订desalting 那里面本来就会有不08/16 18:25
3F：→ Ianthegood: 纯的小片段 再来第一代的nanodrop其实不准到靠北 第三08/16 18:25
4F：→ Ianthegood: 不管怎样你的primer都得拉过standard curve才能拿来定08/16 18:25
5F：→ Ianthegood: 量啊08/16 18:25
所以直接用nanodrop来定量是不对的？
我应该相信data sheet上的定量对吗？
※ 编辑: sianpa00 (27.242.130.58 台湾), 08/16/2019 21:22:03
6F：推 Ianthegood: 不要管定量 总之用同一组同样量的primer拉standard cu 08/16 22:42
7F：→ Ianthegood: rve跟sample 08/16 22:42
8F：推 qiet: 差两倍也差太多? 是选ssDNA定量吗? 08/18 20:30
9F：推 dubius: 不管厂商合成的浓度或你用nanodrop测定的都是不准的 08/19 18:30
10F：推 dubius: 但您问的是引子浓度是否会影响qpcr 答案是会 但不一定 08/19 18:36
11F：推 dubius: 您可以作一个前後因子分别2倍序列稀释的测试矩阵 08/19 18:38
12F：→ dubius: 就可以解答你的问题 08/19 18:39
13F：推 darkbishop: 真的想知道的话 可以用Qubit 非常准 08/22 11:58