作者youngmeme (^_^)
看板Biotech
標題[求救] LY294002無法抑制pAKT
時間Wed Aug 14 23:18:37 2019
各位好
最近將細胞處理LY294002這支PI3K inhibitor 想要探討PI3K-AKT pathway，但跑了好多
次發現pAKT都沒有被抑制（反而還隨濃度升高而上升）
LY294002 stock: 40mM (powder in DMSO)
Final concentration: 20uM , 40uM
Treatment time: 6h
將細胞seeding後隔天約八成滿，處理上述濃度六小時後以冰PBS收細胞，跑Western blot
看pAKT及其下游蛋白表現量，但pAKT都沒有被抑制下來
有想過是不是時間點的問題，所以有收0.5,1,2,3,6,12h時間點，但pAKT只有在0.5h有些
微抑制，其餘皆比control (最高濃度的DMSO only)來得高...
真的trouble shooting 很多次但依然沒解決，請求各位大大救救我嗚嗚嗚
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1F：推 joseph103331: 先Induce再inhibit? 08/14 23:26
2F：→ turtle24: 拿成akt抗體…？ 08/14 23:38
3F：推 qiet: 做過啥troubleshooting 08/14 23:40
4F：→ ManagerW: 有文獻跟你發現的一樣，可以去看他們怎麼解釋。 08/15 03:47
5F：推 tynse71864: 看到的 LY 作用時間都在1h以下欸？ 試試看縮短時間? 08/15 10:52
6F：推 kuror: 最近同事在做相同藥物，也是有同樣現象，但是往更下游看則 08/17 00:51
7F：→ kuror: 是看到確實有抑制整條路徑的效果。 08/17 00:51
8F：推 kuror: 而且記得查Ref 也是有類似現象沒錯 08/17 00:55
9F：→ raiyu: 你的pAKT表現的時間點是什麼時候呢？根據我的經驗時間都蠻 08/19 19:54
10F：→ raiyu: 短的，大約在30分鐘以內 08/19 19:54
11F：→ raiyu: 所以，同一樓，應該是在你處理後細胞pAKT表現量最高的時間 08/19 20:03
12F：→ raiyu: 點去加LY抑制，而不用做這麼多個時間點 08/19 20:03