作者youngmeme (^_^)
看板Biotech
标题[求救] LY294002无法抑制pAKT
时间Wed Aug 14 23:18:37 2019
各位好
最近将细胞处理LY294002这支PI3K inhibitor 想要探讨PI3K-AKT pathway，但跑了好多
次发现pAKT都没有被抑制（反而还随浓度升高而上升）
LY294002 stock: 40mM (powder in DMSO)
Final concentration: 20uM , 40uM
Treatment time: 6h
将细胞seeding後隔天约八成满，处理上述浓度六小时後以冰PBS收细胞，跑Western blot
看pAKT及其下游蛋白表现量，但pAKT都没有被抑制下来
有想过是不是时间点的问题，所以有收0.5,1,2,3,6,12h时间点，但pAKT只有在0.5h有些
微抑制，其余皆比control (最高浓度的DMSO only)来得高...
真的trouble shooting 很多次但依然没解决，请求各位大大救救我呜呜呜
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1F：推 joseph103331: 先Induce再inhibit? 08/14 23:26
2F：→ turtle24: 拿成akt抗体…？ 08/14 23:38
3F：推 qiet: 做过啥troubleshooting 08/14 23:40
4F：→ ManagerW: 有文献跟你发现的一样，可以去看他们怎麽解释。 08/15 03:47
5F：推 tynse71864: 看到的 LY 作用时间都在1h以下欸？ 试试看缩短时间? 08/15 10:52
6F：推 kuror: 最近同事在做相同药物，也是有同样现象，但是往更下游看则 08/17 00:51
7F：→ kuror: 是看到确实有抑制整条路径的效果。 08/17 00:51
8F：推 kuror: 而且记得查Ref 也是有类似现象没错 08/17 00:55
9F：→ raiyu: 你的pAKT表现的时间点是什麽时候呢？根据我的经验时间都蛮 08/19 19:54
10F：→ raiyu: 短的，大约在30分钟以内 08/19 19:54
11F：→ raiyu: 所以，同一楼，应该是在你处理後细胞pAKT表现量最高的时间 08/19 20:03
12F：→ raiyu: 点去加LY抑制，而不用做这麽多个时间点 08/19 20:03