作者paul820612 (正經人)
看板Biotech
標題[求救] 大分子小分子同一張Western membrane
時間Thu Jun 13 10:26:25 2019
大家好
今天老闆叫我做一張Western
要把小分子(約16KD)還有大分子(大約110KD)跑在同一張membrane裡面
實驗室用的是7.5%的gel
transfer 條件是100V 1hr
現在查到的資料都沒有說怎麼跑在一起
不知道有什麼建議嗎?
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1F：推 littleQwQ: %數應該要依照分子量做調整 如果你要跑同一張的話 依你 06/13 11:09
2F：→ littleQwQ: 的狀況應該要調整至12% 110kDa直接剪75或100以上 06/13 11:09
3F：→ trumpet: 如果大分子先跑，小分子後跑呢？ 06/13 12:28
4F：推 tynse71864: 12% 跑， 我之前壓 15& 130kda的沒問題； transfer時 06/13 12:40
5F：→ tynse71864: 間拉長些讓大分子好過去就是 06/13 12:40
6F：推 ampicillin: 跑gradient gel阿 06/13 13:42
7F：推 steve42125: 16跟110跑同一張gel 沒問題很好分開 06/13 16:53
8F：→ steve42125: 建議可以跑10~12%的gel 基本上不用擔心跑不開 差很多 06/13 16:53
9F：→ steve42125: 而且membrane還可以很豪邁的剪不用怕剪到band 06/13 16:54
10F：推 rasaze: 用一般commercial gradient gel都辦得到吧？ 06/13 18:19
11F：推 tynse71864: 沒錢可以自製8+12% step gel 啦，看你要多美 06/13 23:06
12F：→ Qaaaa: 不在乎美觀的話 單一10% gel你這個kd範圍還可以接受 06/13 23:19
13F：推 BGG: 市售的 gradient gel,都可以啊！Transfer 用濕式，效率比較好 06/15 00:39
14F：推 maurice9325: 用gradient gel 或配12%+7.5% gel 結案。 06/15 13:44
15F：推 MADAOTW: 大分子還是要拉開的，要省麻煩就自己搞 gradient 06/20 15:24