作者paul820612 (正经人)
看板Biotech
标题[求救] 大分子小分子同一张Western membrane
时间Thu Jun 13 10:26:25 2019
大家好
今天老板叫我做一张Western
要把小分子(约16KD)还有大分子(大约110KD)跑在同一张membrane里面
实验室用的是7.5%的gel
transfer 条件是100V 1hr
现在查到的资料都没有说怎麽跑在一起
不知道有什麽建议吗?
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1F：推 littleQwQ: %数应该要依照分子量做调整 如果你要跑同一张的话 依你 06/13 11:09
2F：→ littleQwQ: 的状况应该要调整至12% 110kDa直接剪75或100以上 06/13 11:09
3F：→ trumpet: 如果大分子先跑，小分子後跑呢？ 06/13 12:28
4F：推 tynse71864: 12% 跑， 我之前压 15& 130kda的没问题； transfer时 06/13 12:40
5F：→ tynse71864: 间拉长些让大分子好过去就是 06/13 12:40
6F：推 ampicillin: 跑gradient gel阿 06/13 13:42
7F：推 steve42125: 16跟110跑同一张gel 没问题很好分开 06/13 16:53
8F：→ steve42125: 建议可以跑10~12%的gel 基本上不用担心跑不开 差很多 06/13 16:53
9F：→ steve42125: 而且membrane还可以很豪迈的剪不用怕剪到band 06/13 16:54
10F：推 rasaze: 用一般commercial gradient gel都办得到吧？ 06/13 18:19
11F：推 tynse71864: 没钱可以自制8+12% step gel 啦，看你要多美 06/13 23:06
12F：→ Qaaaa: 不在乎美观的话 单一10% gel你这个kd范围还可以接受 06/13 23:19
13F：推 BGG: 市售的 gradient gel,都可以啊！Transfer 用湿式，效率比较好 06/15 00:39
14F：推 maurice9325: 用gradient gel 或配12%+7.5% gel 结案。 06/15 13:44
15F：推 MADAOTW: 大分子还是要拉开的，要省麻烦就自己搞 gradient 06/20 15:24