作者pinkyuyu15 (pinkyuyu)
看板Biotech
標題[求救] 關於SDS-PAGE的問題
時間Sat May 25 16:40:44 2019
想知道為什麼跑出來的sample都會在15k附近會有一坨濃濃的band?
剛好又與要看的蛋白質大小會重疊到,該怎麼把那一坨band分離開來呢？還是破菌使用的b
uffer也會有影響呢？
菌種使用BL21(DE3)plyss
Gel不論使用12%或15%都會有這種狀況QQ
https://i.imgur.com/r1TQZXH.jpg
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1F：→ Ianthegood: 嗯 為什麼真的不重要 你有抗體壓western嗎? 05/25 17:28
2F：→ Ianthegood: loading control做好 勉強可以說是overexpression 05/25 17:28
3F：→ Ianthegood: 然後你marker沒標誰知道15k那坨是哪坨 05/25 17:29
5F：→ pinkyuyu15: ！可是負控也是這樣，但我看paper上面的結果圖都沒有 05/25 18:17
6F：→ pinkyuyu15: 這樣一坨然後就看到表現蛋白了！想說是不是沒跑好擠 05/25 18:17
7F：→ pinkyuyu15: 成一坨才看不到 05/25 18:17
8F：推 Ianthegood: sds-page不是什麼高科技,尤其是自己配的tris based, 05/25 18:24
9F：→ Ianthegood: 沒有太多可以調整的地方, 如果你的host就是會有自己 05/25 18:24
10F：→ Ianthegood: 的蛋白在那個size那1D的PAGE就是沒辦法分開來。壓west 05/25 18:24
11F：→ Ianthegood: ern吧 05/25 18:24
12F：→ Ianthegood: 然後標marker的意思是在marker旁邊標上代表的mw 不要 05/25 18:25
13F：→ Ianthegood: 影響到膠本身的呈現 05/25 18:25
14F：推 micocat: 有加lysozyme 嗎 05/26 18:07
15F：→ yuasa: 真的想要分更開，可以考慮調膠的%，有一種gradient%的膠可 05/26 22:34
16F：→ yuasa: 以買(pre-cast)。或者是跑更大張的膠 05/26 22:35
17F：→ yuasa: 但如果真的完全重疊，跑再開也沒用。反正要做Western對吧? 05/26 22:37
18F：推 alaric: Upper Gel 多跑些 05/26 23:34
19F：→ shenhsu: 看paper上面的結果圖都沒有..你確定材料跟paper完全一樣? 05/27 16:45
20F：→ shenhsu: 該不會paper的結果圖其實是western吧XDDD 05/27 16:47
21F：推 ralph31567: 什麼都沒標很難幫 induce 前後有沒有差異？ 萬一大小 05/28 23:01
22F：→ ralph31567: 差不多,有沒有抗體可以做western? 05/28 23:01
23F：→ qumai: 你要比較誘導前誘導後的band 還有沒有plasmid的菌的band 05/29 09:35
24F：→ qumai: 那應該菌本身的蛋白質,你要分開就是純化你的蛋白 05/29 09:36
25F：→ qumai: 不然就是像前面說的western 用抗體染 05/29 09:37
26F：→ Qaaaa: 可以改另一個應該是tricine的buffer system 解析力會大增 06/02 15:08
27F：→ Qaaaa: 如果實在沒有抗體的話 然後再改下膠的趴數 使你要的位置可 06/02 15:08
28F：→ Qaaaa: 以拉的比較開 06/02 15:08
29F：→ boy12345761: 蛋白質濃度好像有點高？well裡好像還卡很多 06/13 02:05
30F：推 jinshiG: 跑2D 06/14 08:16