作者pinkyuyu15 (pinkyuyu)
看板Biotech
标题[求救] 关於SDS-PAGE的问题
时间Sat May 25 16:40:44 2019
想知道为什麽跑出来的sample都会在15k附近会有一坨浓浓的band?
刚好又与要看的蛋白质大小会重叠到,该怎麽把那一坨band分离开来呢？还是破菌使用的b
uffer也会有影响呢？
菌种使用BL21(DE3)plyss
Gel不论使用12%或15%都会有这种状况QQ
https://i.imgur.com/r1TQZXH.jpg
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1F：→ Ianthegood: 嗯 为什麽真的不重要 你有抗体压western吗? 05/25 17:28
2F：→ Ianthegood: loading control做好 勉强可以说是overexpression 05/25 17:28
3F：→ Ianthegood: 然後你marker没标谁知道15k那坨是哪坨 05/25 17:29
5F：→ pinkyuyu15: ！可是负控也是这样，但我看paper上面的结果图都没有 05/25 18:17
6F：→ pinkyuyu15: 这样一坨然後就看到表现蛋白了！想说是不是没跑好挤 05/25 18:17
7F：→ pinkyuyu15: 成一坨才看不到 05/25 18:17
8F：推 Ianthegood: sds-page不是什麽高科技,尤其是自己配的tris based, 05/25 18:24
9F：→ Ianthegood: 没有太多可以调整的地方, 如果你的host就是会有自己 05/25 18:24
10F：→ Ianthegood: 的蛋白在那个size那1D的PAGE就是没办法分开来。压west 05/25 18:24
11F：→ Ianthegood: ern吧 05/25 18:24
12F：→ Ianthegood: 然後标marker的意思是在marker旁边标上代表的mw 不要 05/25 18:25
13F：→ Ianthegood: 影响到胶本身的呈现 05/25 18:25
14F：推 micocat: 有加lysozyme 吗 05/26 18:07
15F：→ yuasa: 真的想要分更开，可以考虑调胶的%，有一种gradient%的胶可 05/26 22:34
16F：→ yuasa: 以买(pre-cast)。或者是跑更大张的胶 05/26 22:35
17F：→ yuasa: 但如果真的完全重叠，跑再开也没用。反正要做Western对吧? 05/26 22:37
18F：推 alaric: Upper Gel 多跑些 05/26 23:34
19F：→ shenhsu: 看paper上面的结果图都没有..你确定材料跟paper完全一样? 05/27 16:45
20F：→ shenhsu: 该不会paper的结果图其实是western吧XDDD 05/27 16:47
21F：推 ralph31567: 什麽都没标很难帮 induce 前後有没有差异？ 万一大小 05/28 23:01
22F：→ ralph31567: 差不多,有没有抗体可以做western? 05/28 23:01
23F：→ qumai: 你要比较诱导前诱导後的band 还有没有plasmid的菌的band 05/29 09:35
24F：→ qumai: 那应该菌本身的蛋白质,你要分开就是纯化你的蛋白 05/29 09:36
25F：→ qumai: 不然就是像前面说的western 用抗体染 05/29 09:37
26F：→ Qaaaa: 可以改另一个应该是tricine的buffer system 解析力会大增 06/02 15:08
27F：→ Qaaaa: 如果实在没有抗体的话 然後再改下胶的趴数 使你要的位置可 06/02 15:08
28F：→ Qaaaa: 以拉的比较开 06/02 15:08
29F：→ boy12345761: 蛋白质浓度好像有点高？well里好像还卡很多 06/13 02:05
30F：推 jinshiG: 跑2D 06/14 08:16