作者gb22hdfh55 (尖頭拉瑞)
看板Biotech
標題[求救] 一題生化實驗相關
時間Wed May 15 15:41:25 2019
做作業時一直對這題很沒有頭緒，教授給的提示是BL21-star跑膠結果不太對(但我看不出
來？)想請教板上大神的想法跟答案。
先謝謝各位
https://i.imgur.com/OV2p6DC.jpg
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1F：推 july81212: 這什麼題目...你們連expression cell line的genotype 05/15 16:43
2F：→ july81212: 都要背喔= = 05/15 16:43
3F：推 july81212: 然後用的plasmid 系統沒講，蛋白大小也沒寫 這出題是 05/15 16:46
4F：→ july81212: 要問什麼= = 05/15 16:46
5F：推 Ianthegood: 這是作業所以是不用背的吧 樓上很激動XD 05/15 17:34
6F：推 Ianthegood: 我覺得關鍵在這幾個strain的差異 bl21是沒有內建T7的 05/15 17:36
7F：→ Ianthegood: star其實是商標這個不太好 type是BL21DE3 內建T7 ros 05/15 17:36
8F：→ Ianthegood: etta則是codon optimised for eukaryotic gene 05/15 17:36
9F：→ Ianthegood: 所以control的band要嘛是leaky expression要嘛是size 05/15 17:37
10F：→ Ianthegood: 很像的其他protein 05/15 17:37
11F：→ Ianthegood: 看起來只有de3真的有被induce 推理plasmid backbone是 05/15 17:38
12F：→ Ianthegood: iptg推的T7 promoter 05/15 17:38
13F：→ Ianthegood: 然後loading control滿糟的 很難比較不同lane之間 05/15 17:39
14F：推 Ianthegood: 所以也有可能是de3完全沒有被induce 看到的差異只是lo 05/15 17:42
15F：→ Ianthegood: ading不同 然後要嘛是iptg完全沒有作用因為promoter 05/15 17:42
16F：→ Ianthegood: 不是t7 或是全部都被推到inclusion body或是被degrade 05/15 17:42
17F：→ Ianthegood: 掉了 05/15 17:42
18F：推 Ianthegood: 好你可以設計實驗測試這些了 05/15 17:43
19F：推 jabari: 是不會跑western喔... 咦？ 05/18 02:34
20F：推 joseph103331: 教授說的是star的結果"不太對"還是"不一樣"? 05/18 21:55
21F：→ joseph103331: 如果有做WB,以誘導表現的角度來看,star是比較好的 05/18 21:56
22F：→ joseph103331: 不同表達系統會不一樣正常,選需要的才是一般想法 05/18 21:58
23F：推 joseph103331: 如果真的是要問I大講的問題,這個問題設計確實蠻爛的 05/18 22:01
24F：推 joseph103331: 表現不一致? 管他一致不一致,我選可溶蛋白質多的 05/18 22:04
25F：→ joseph103331: 問題應該改成,genotype為何會造成表現上的差異 05/18 22:05
26F：→ joseph103331: 以及小明該如何驗證這點,做個WB跟loading control吧 05/18 22:06
27F：→ Ianthegood: 怎麼樣都是先抽個mini送定序吧... 05/18 22:57
28F：推 duriamon: 除非你的老師上課有教這幾株菌種的特性或是告訴你一些前 06/01 19:00
29F：→ duriamon: 提，要不然這問題沒啥意義，可能發生問題的端點不少。 06/01 19:00
30F：推 dageegee: 小明技術不好 06/18 17:35