作者gb22hdfh55 (尖头拉瑞)
看板Biotech
标题[求救] 一题生化实验相关
时间Wed May 15 15:41:25 2019
做作业时一直对这题很没有头绪，教授给的提示是BL21-star跑胶结果不太对(但我看不出
来？)想请教板上大神的想法跟答案。
先谢谢各位
https://i.imgur.com/OV2p6DC.jpg
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1F：推 july81212: 这什麽题目...你们连expression cell line的genotype 05/15 16:43
2F：→ july81212: 都要背喔= = 05/15 16:43
3F：推 july81212: 然後用的plasmid 系统没讲，蛋白大小也没写 这出题是 05/15 16:46
4F：→ july81212: 要问什麽= = 05/15 16:46
5F：推 Ianthegood: 这是作业所以是不用背的吧 楼上很激动XD 05/15 17:34
6F：推 Ianthegood: 我觉得关键在这几个strain的差异 bl21是没有内建T7的 05/15 17:36
7F：→ Ianthegood: star其实是商标这个不太好 type是BL21DE3 内建T7 ros 05/15 17:36
8F：→ Ianthegood: etta则是codon optimised for eukaryotic gene 05/15 17:36
9F：→ Ianthegood: 所以control的band要嘛是leaky expression要嘛是size 05/15 17:37
10F：→ Ianthegood: 很像的其他protein 05/15 17:37
11F：→ Ianthegood: 看起来只有de3真的有被induce 推理plasmid backbone是 05/15 17:38
12F：→ Ianthegood: iptg推的T7 promoter 05/15 17:38
13F：→ Ianthegood: 然後loading control满糟的 很难比较不同lane之间 05/15 17:39
14F：推 Ianthegood: 所以也有可能是de3完全没有被induce 看到的差异只是lo 05/15 17:42
15F：→ Ianthegood: ading不同 然後要嘛是iptg完全没有作用因为promoter 05/15 17:42
16F：→ Ianthegood: 不是t7 或是全部都被推到inclusion body或是被degrade 05/15 17:42
17F：→ Ianthegood: 掉了 05/15 17:42
18F：推 Ianthegood: 好你可以设计实验测试这些了 05/15 17:43
19F：推 jabari: 是不会跑western喔... 咦？ 05/18 02:34
20F：推 joseph103331: 教授说的是star的结果"不太对"还是"不一样"? 05/18 21:55
21F：→ joseph103331: 如果有做WB,以诱导表现的角度来看,star是比较好的 05/18 21:56
22F：→ joseph103331: 不同表达系统会不一样正常,选需要的才是一般想法 05/18 21:58
23F：推 joseph103331: 如果真的是要问I大讲的问题,这个问题设计确实蛮烂的 05/18 22:01
24F：推 joseph103331: 表现不一致? 管他一致不一致,我选可溶蛋白质多的 05/18 22:04
25F：→ joseph103331: 问题应该改成,genotype为何会造成表现上的差异 05/18 22:05
26F：→ joseph103331: 以及小明该如何验证这点,做个WB跟loading control吧 05/18 22:06
27F：→ Ianthegood: 怎麽样都是先抽个mini送定序吧... 05/18 22:57
28F：推 duriamon: 除非你的老师上课有教这几株菌种的特性或是告诉你一些前 06/01 19:00
29F：→ duriamon: 提，要不然这问题没啥意义，可能发生问题的端点不少。 06/01 19:00
30F：推 dageegee: 小明技术不好 06/18 17:35