作者t5r4e3w2q123 (jacky1227)
看板Biotech
標題DNA電泳圖判讀
時間Fri May 3 22:55:32 2019
各位前輩好～～
由於小弟是化工系對於電泳圖的判讀不太了解，請各位前輩多多指教～
以下是小弟使用自製的pcr平台所跑出來的沙門氏菌DNA電泳圖（目標位置200bp)
https://i.imgur.com/gPtlVAJ.jpg
請問各位前輩圖中band的位置過高，有可能是什麼原因所造成的？
謝謝大家～～
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※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1556895334.A.F31.html
1F：→ milkpa: all genomic DNA 05/04 00:32
2F：推 Bows: PCR失敗 05/04 01:18
3F：→ t5r4e3w2q123: 請問樓上兩位前輩造成失敗的原因是因為DNA未打開嗎 05/04 07:49
4F：→ t5r4e3w2q123: ？ 05/04 07:49
5F：推 lelojack: 你們的band跑的不錯欸 05/04 08:32
6F：推 as862437: PCR 失敗沒東西，最上面的是gDNA 05/04 10:15
7F：→ turtle24: 總覺得這是1kb marker, 最下面是500bp嗎 05/04 10:29
8F：→ turtle24: 或250bp 05/04 10:29
9F：→ t5r4e3w2q123: T大前輩最下面是100bp 05/04 10:47
10F：推 ernielwl: 1.marker大小要標示出來,你在做報告的時候最好也這樣 05/04 11:44
11F：→ ernielwl: 對別人判斷上會比較容易了解 05/04 11:44
12F：→ ernielwl: 2.sample條帶跑在marker最大片段位置甚至更上方一些 05/04 11:45
13F：→ ernielwl: 這個是genomic DNA, 如果實驗有經過pcr那結果是失敗的 05/04 11:46
14F：→ ernielwl: 3.做pcr之前你的template最好可以定量一下,下pcr的量不 05/04 11:47
15F：→ ernielwl: 要太多 05/04 11:47
16F：→ ernielwl: 最後三個跑道明顯是過量了.... 05/04 11:47
17F：→ t5r4e3w2q123: 好的謝謝E大前輩的建議，不過我是同一管pcr試劑下去 05/04 12:02
18F：→ t5r4e3w2q123: 做實驗的，條件只有調整pcr溫度 05/04 12:02
19F：→ jsi: 樣品若是agar上的菌落，用無菌tip尖端沾一下菌落，少到幾乎看 05/04 12:36
20F：→ jsi: 不到的量作為pcr template。樣品若是菌液或DNA，可搜尋網路上 05/04 12:37
21F：→ jsi: pcr template amount有建議用量，若沒有定量儀器，可以試著將 05/04 12:38
22F：→ jsi: 菌液或DNA作數個10X連續稀釋，分別做為template進行PCR，應能 05/04 12:40
23F：→ jsi: 看見結果。有問題可再把結果放上來詢問看看。 05/04 12:41
24F：推 ernielwl: primer加錯或是專一性不足,Taq沒加到或壞掉 05/04 15:35
25F：→ ernielwl: annealing溫度不對,這些都有可能 05/04 15:36
26F：→ ernielwl: 實驗新手最好還是有一個人可以帶著你做一次 05/04 15:38
27F：→ t5r4e3w2q123: 謝謝各位前輩的建議～～ 05/04 15:52
28F：推 lail: 有positive control嗎？確定primer都可以用，且試劑都沒問題 05/04 18:35
29F：推 beraks: 我的經驗是沙門氏菌不用純化genomic 05/06 10:17
30F：→ beraks: 培養液25/1就跑的出來，我是跑invA 05/06 10:18
31F：推 qiet: 要有positive control阿, 不只是sample, 连PCR平台也是要用 05/06 13:45
32F：→ qiet: 确定是能用的机器来跑, PCR条件也都要确定 05/06 13:45