作者t5r4e3w2q123 (jacky1227)
看板Biotech
标题DNA电泳图判读
时间Fri May 3 22:55:32 2019
各位前辈好～～
由於小弟是化工系对於电泳图的判读不太了解，请各位前辈多多指教～
以下是小弟使用自制的pcr平台所跑出来的沙门氏菌DNA电泳图（目标位置200bp)
https://i.imgur.com/gPtlVAJ.jpg
请问各位前辈图中band的位置过高，有可能是什麽原因所造成的？
谢谢大家～～
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1F：→ milkpa: all genomic DNA 05/04 00:32
2F：推 Bows: PCR失败 05/04 01:18
3F：→ t5r4e3w2q123: 请问楼上两位前辈造成失败的原因是因为DNA未打开吗 05/04 07:49
4F：→ t5r4e3w2q123: ？ 05/04 07:49
5F：推 lelojack: 你们的band跑的不错欸 05/04 08:32
6F：推 as862437: PCR 失败没东西，最上面的是gDNA 05/04 10:15
7F：→ turtle24: 总觉得这是1kb marker, 最下面是500bp吗 05/04 10:29
8F：→ turtle24: 或250bp 05/04 10:29
9F：→ t5r4e3w2q123: T大前辈最下面是100bp 05/04 10:47
10F：推 ernielwl: 1.marker大小要标示出来,你在做报告的时候最好也这样 05/04 11:44
11F：→ ernielwl: 对别人判断上会比较容易了解 05/04 11:44
12F：→ ernielwl: 2.sample条带跑在marker最大片段位置甚至更上方一些 05/04 11:45
13F：→ ernielwl: 这个是genomic DNA, 如果实验有经过pcr那结果是失败的 05/04 11:46
14F：→ ernielwl: 3.做pcr之前你的template最好可以定量一下,下pcr的量不 05/04 11:47
15F：→ ernielwl: 要太多 05/04 11:47
16F：→ ernielwl: 最後三个跑道明显是过量了.... 05/04 11:47
17F：→ t5r4e3w2q123: 好的谢谢E大前辈的建议，不过我是同一管pcr试剂下去 05/04 12:02
18F：→ t5r4e3w2q123: 做实验的，条件只有调整pcr温度 05/04 12:02
19F：→ jsi: 样品若是agar上的菌落，用无菌tip尖端沾一下菌落，少到几乎看 05/04 12:36
20F：→ jsi: 不到的量作为pcr template。样品若是菌液或DNA，可搜寻网路上 05/04 12:37
21F：→ jsi: pcr template amount有建议用量，若没有定量仪器，可以试着将 05/04 12:38
22F：→ jsi: 菌液或DNA作数个10X连续稀释，分别做为template进行PCR，应能 05/04 12:40
23F：→ jsi: 看见结果。有问题可再把结果放上来询问看看。 05/04 12:41
24F：推 ernielwl: primer加错或是专一性不足,Taq没加到或坏掉 05/04 15:35
25F：→ ernielwl: annealing温度不对,这些都有可能 05/04 15:36
26F：→ ernielwl: 实验新手最好还是有一个人可以带着你做一次 05/04 15:38
27F：→ t5r4e3w2q123: 谢谢各位前辈的建议～～ 05/04 15:52
28F：推 lail: 有positive control吗？确定primer都可以用，且试剂都没问题 05/04 18:35
29F：推 beraks: 我的经验是沙门氏菌不用纯化genomic 05/06 10:17
30F：→ beraks: 培养液25/1就跑的出来，我是跑invA 05/06 10:18
31F：推 qiet: 要有positive control阿, 不只是sample, 连PCR平台也是要用 05/06 13:45
32F：→ qiet: 确定是能用的机器来跑, PCR条件也都要确定 05/06 13:45