作者Marcus2014 (馬克斯)
看板Biotech
標題[求救] 請問如何設計用Elisa做蛋白質定量的assay
時間Tue Apr 2 21:48:42 2019
小弟目前用昆蟲細胞表現一個外源蛋白
但是因為前面的人沒有設計任何tag
所以基本上無法純化出來該蛋白定量
但是我們的實驗後段需要的樣品純度
不需要很高 但需要知道該蛋白的總量
想來想去好像只能用ELISA 做定量
可能比較準一點
實驗室剛好也有
該蛋白的單株抗體跟多株抗體
請問有前輩設計過類似蛋白質定量assay
或是有相關文獻可以參考嗎？
感謝：)
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1F：推 huangsw: ELISA會放大 沒tag 不代表不能純化啊......04/02 22:34
2F：推 joseph103331: 硫酸銨或是陰陽離子交換法都可以純化XD04/02 23:07
3F：推 joseph103331: 管柱很多,還有size-exclusive可以選04/02 23:09
4F：→ joseph103331: 而且也不是affinity就比較純(幹04/02 23:10
5F：推 Ianthegood: 表現量夠高 多過幾根column總是可以純化的 不過你要04/02 23:32
6F：→ Ianthegood: 建standard curve可能還是得要MS或AAA04/02 23:32
7F：推 fishg1216: 利用western blot推估濃度?04/03 01:42
8F：推 Ianthegood: 樓上western跟elisa一樣 你得知道多少protein是多大04/03 15:47
9F：→ Ianthegood: 根的band才行04/03 15:47
10F：推 joseph103331: 做序列稀釋可以得到相對標準曲線,頂多就這樣04/03 15:55
11F：→ joseph103331: 取總蛋白量跟吸光值畫圖,有這個curve也是可以04/03 15:56
12F：→ huangsw: 考量到你要去測某種分析，勢必要提供mock當control。如果04/03 17:32
13F：→ huangsw: 你終究要知道量跟純度，不如現在就開始想純化方法04/03 17:32
14F：推 july81212: 先想純化方法吧 總要先有標準濃度才能去做減量線 ELIS04/03 18:29
15F：→ july81212: A WB MS只是detection 而已04/03 18:29
16F：推 july81212: 而且你有單株 大不了下重本直接conjugate beads去跑af04/03 18:31
17F：→ july81212: finity04/03 18:31
18F：推 ysfang623: 有抗體，可以做pull down assay去抓04/04 10:32
目前有commercials 已知濃度的目標蛋白可以當elisa standard control 請問這樣子可
以設計elisa assay來抓 cell lysate的目標蛋白濃度嗎？抱歉之前幾乎沒有elisa的經驗
，還請賜教，謝謝各位前輩！
※ 編輯: Marcus2014 (115.82.38.101), 04/07/2019 10:35:39
19F：推 joseph103331: 是可以啦，不過為什麼不買這個做實驗就好? 04/07 12:36
20F：推 Ianthegood: 你買得到standard sample夠純就跑BCA就好啦 浪費兩個 04/07 23:33
21F：→ Ianthegood: 小時跑elisa幹嘛 傻傻的 04/07 23:33
22F：→ Ianthegood: 然後對啊買得到幹嘛自己純化 04/07 23:33
23F：推 michealking: 買現成的比就好了 04/12 00:46
24F：推 rimo0169: BCA加一票 04/13 14:08
25F：推 ararthur: ELISA是screen用的 不要砸自己的腳 簡單coomassie blue 04/29 13:53
26F：→ ararthur: 跟commercial的對照先 純度也可以 04/29 13:54