作者Marcus2014 (马克斯)
看板Biotech
标题[求救] 请问如何设计用Elisa做蛋白质定量的assay
时间Tue Apr 2 21:48:42 2019
小弟目前用昆虫细胞表现一个外源蛋白
但是因为前面的人没有设计任何tag
所以基本上无法纯化出来该蛋白定量
但是我们的实验後段需要的样品纯度
不需要很高 但需要知道该蛋白的总量
想来想去好像只能用ELISA 做定量
可能比较准一点
实验室刚好也有
该蛋白的单株抗体跟多株抗体
请问有前辈设计过类似蛋白质定量assay
或是有相关文献可以参考吗？
感谢：)
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1F：推 huangsw: ELISA会放大 没tag 不代表不能纯化啊......04/02 22:34
2F：推 joseph103331: 硫酸铵或是阴阳离子交换法都可以纯化XD04/02 23:07
3F：推 joseph103331: 管柱很多,还有size-exclusive可以选04/02 23:09
4F：→ joseph103331: 而且也不是affinity就比较纯(干04/02 23:10
5F：推 Ianthegood: 表现量够高 多过几根column总是可以纯化的 不过你要04/02 23:32
6F：→ Ianthegood: 建standard curve可能还是得要MS或AAA04/02 23:32
7F：推 fishg1216: 利用western blot推估浓度?04/03 01:42
8F：推 Ianthegood: 楼上western跟elisa一样 你得知道多少protein是多大04/03 15:47
9F：→ Ianthegood: 根的band才行04/03 15:47
10F：推 joseph103331: 做序列稀释可以得到相对标准曲线,顶多就这样04/03 15:55
11F：→ joseph103331: 取总蛋白量跟吸光值画图,有这个curve也是可以04/03 15:56
12F：→ huangsw: 考量到你要去测某种分析，势必要提供mock当control。如果04/03 17:32
13F：→ huangsw: 你终究要知道量跟纯度，不如现在就开始想纯化方法04/03 17:32
14F：推 july81212: 先想纯化方法吧 总要先有标准浓度才能去做减量线 ELIS04/03 18:29
15F：→ july81212: A WB MS只是detection 而已04/03 18:29
16F：推 july81212: 而且你有单株 大不了下重本直接conjugate beads去跑af04/03 18:31
17F：→ july81212: finity04/03 18:31
18F：推 ysfang623: 有抗体，可以做pull down assay去抓04/04 10:32
目前有commercials 已知浓度的目标蛋白可以当elisa standard control 请问这样子可
以设计elisa assay来抓 cell lysate的目标蛋白浓度吗？抱歉之前几乎没有elisa的经验
，还请赐教，谢谢各位前辈！
※ 编辑: Marcus2014 (115.82.38.101), 04/07/2019 10:35:39
19F：推 joseph103331: 是可以啦，不过为什麽不买这个做实验就好? 04/07 12:36
20F：推 Ianthegood: 你买得到standard sample够纯就跑BCA就好啦 浪费两个 04/07 23:33
21F：→ Ianthegood: 小时跑elisa干嘛 傻傻的 04/07 23:33
22F：→ Ianthegood: 然後对啊买得到干嘛自己纯化 04/07 23:33
23F：推 michealking: 买现成的比就好了 04/12 00:46
24F：推 rimo0169: BCA加一票 04/13 14:08
25F：推 ararthur: ELISA是screen用的 不要砸自己的脚 简单coomassie blue 04/29 13:53
26F：→ ararthur: 跟commercial的对照先 纯度也可以 04/29 13:54